关于土壤细菌基因组DNA做PCR的问题！！！

wooc水瓶 2009-11-01 土壤核酸提取浏览 445 次

各位能帮上忙的大侠们好，我用酚仿法从土壤中提取出基因组DNA用于做PCR，但就是没有产物，但是另外从大肠杆菌中提取的DNA扩增没有任何问题，效果非常好。所以可以说明是模板出了问题，... 各位能帮上忙的大侠们好，我用酚仿法从土壤中提取出基因组DNA用于做PCR，但就是没有产物，但是另外从大肠杆菌中提取的DNA扩增没有任何问题，效果非常好。所以可以说明是模板出了问题，可是模板到底出了什么问题，还请教大侠们告知一二，附图是我通过胶回收得来的土壤细菌的模板DNA，23000的marker!~
感激！！！

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lqqqianqi 发布日期：2009-11-04

Mmmmmm，这个问题啊，从你的描述确实是模板的问题了，导致PCR失败的模板问题无非两种：浓度和纯度，LS的兄弟说的不错，模板浓度太大不行，稀释做个梯度看看也许管用；另一方面，纯度的控制就没这么简单了，从土壤中提取的基因组中包括肯定不止一种微生物的DNA，对任何一种微生物DNA来说，其他微生物的DNA都算是杂质而且无法去除，同时氛氯仿法提取的DNA通常纯度不会太高，尤其你的介质又是土壤，难免有其他杂质除不干净，建议你用试剂盒纯化一下你的模板，我常用的纯化基因组的试剂盒是OMEga的PCR产物纯化试剂盒，其实对模板进行稀释，也就是对杂质进行稀释，以期达到一种平衡，使得模板能够作用而杂质不起作用，希望对你有帮助吧，另：我不是做广告的

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Fiend丶影发布日期：2009-11-08

1。土壤杂质多，酶YZ剂自然多，我们以前做粪便，都用玻璃乳吸附法纯化DNA的。你Z好改变模板提取方法，比如玻璃乳吸附DNA。
2。大肠杆菌能做出来PCR结果，你能肯定土壤中保证存在同样的大肠杆菌模板么？如果模板不同你必须改变相应的引物。（仅提个醒）。你从土壤中提取的DNA模板究竟是什么物种的模板？改变引物试试看哈。

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heitiansh1 发布日期：2009-11-02

做pcr模板量不宜过大，你可以尝试做几个不同的组别对照，加不同的模板量，其他条件不变，来看看加多少量合适。看你的电泳图，总dna的量应该是很大的，所以20ul里加0.5甚至更少量的模板应该就够了。

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