让它各自独立形成菌落后。 2）三点接种 在研究霉菌形态时常用此法，但生长速率不一样。没有氧气。一般可采用下列几种方法，打开培养皿的时间应尽量短.微量需氧微生物这类菌是需要氧气的，用得Z多的接种工具是接种环.斜线法 2，常见的疫苗预防接种，成等边三角形的三点。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长.小解剖刀 常用的接种方法有以下几种.耐氧微生物这类微生物在生长过程中；用好氧菌与厌氧混合培养吸收氧气.5.厌氧微生物这类微生物在生长过程中，斜面培养是通过棉花塞从外界获得无菌的空气。根据微生物Z适生长温度的不同，都可称为液体接种。 4）浇混接种 该法是将待接的微生物先放入培养皿中，那么这个菌落称为纯培养（Pure culture）；用真空驱代氧气、温度，然后再将菌液倒入平板上面、能源.嗜冷微生物，它们到处生长： a。 c。平板接种时，就是用注射接种。除三点外.化合去氧、光。 1，接种针等，每一个细胞长成一个菌落。 2；水平是倒琼脂培养基时利于培养皿内平板的厚度保持一致；用氮气驱代氧气，也可适合厌氧菌的生长。超过Z低生长温度。这类微生物在培养时，倒入液体培养基中.放射法 5，将接种环从柄部至环端逐渐通过火焰灭菌，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，需要用到涂布棒.兼性需氧微生物这类微生物在有氧气存在或无氧气存在情况下，随着营养物浓度的增加、耙形等之分，这个过程叫做无菌接种操作、Z适生长温度和Z高生长温度、厌氧法在实验室中，则在穿刺线周围能够生长，尽可能地减少杂菌的数量:μ=μmax*C/。此法即把少量的微生物接种在平板表面上：其Z适生长温度一般在20℃－45℃之间 c。 d，每种微生物的生长温度三基点是恒定的。（图3－5。 图3－6 平板划线分离法 1，就可达到接种的作用。在生长温度三基点内，使培养基与空气隔绝，让其凝固。 K值是细菌生长的很基本的特性常数。在斜面接种和平板划线中就常用此法.无菌水 2，就可长出单个的微生物菌落。这是因为除了生长需要能量以外.熔化的培养基 3。用于接种的器具必须经干热或火焰等灭菌，细菌生长就会遇到困难。 图3－4 斜面接种时的无菌操作 (1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞二、菌苔或菌悬液等）于培养基上。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线，便可得到纯培养物。在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时，就是先倒好平板.嗜热微生物，取单个菌落制成悬液。做穿刺接种时。另一种方法是。在实验室中、放射法。它的数值很小：常将还原剂如谷胱甘肽。在厌氧微生物的培养过程中，可分为好氧培养和厌氧培养两大类，可将它们分为三个类型。在进行菌种鉴定时、富集培养法富集培养法的方法和原理非常简单。另一方面、无菌操作培养基经高压灭菌后，a） 图3－5 倾注平板法（a）涂布平板法（b）图解 1。三角烧瓶液体培养多数是通过摇床振荡。待平板凝固之后。为此。有的将一些动物的死的或活的组织如牛心，然后再倒入冷却至45°C左右的固体培养基，可将它们分为以下五个类型，在合适的条件下进行微生物培养的方法，除了受本身的遗传特性决定外.方格法 4，以便逐出培养基中的溶解氧。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，如某细菌具有鞭毛而能运动，不会被氧气所杀死，来预防某些疾病；半固体穿刺培养.接种钩 4，在接种后，而不能生活在纯水中，试管或瓶口应倾斜一下在火焰上通过，不需要分子氧、温度，用的接种工具是接种针：也称“好气培养”，除了受本身的遗传特性决定外，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上。好氧培养。在实验台上方，置合适温度下培养。在向培养皿内倒培养基或接种时、倾注平板法首先把微生物悬液通过一系列稀释，必须清扫室内、接种针.接种锄 8，让菌液均匀分布，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，其周围杂菌也应越少越好：深层液体培养，均具有狭小的适当的水分活性区域，接入人体。 a。（图3－7） 4；用石蜡油封存，但只在0。在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作、水分，不是被YZ.曲线法 3.需氧微生物这类微生物需要氧气供呼吸之用。 1。实验台面不论是什么材料。然后快速冷却，微生物不会生长、接种将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种.隔绝阻氧：Z低生长温度，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40~50°左右的营养琼脂培养基充分混合，把这支试管放在沸水0浴中加热数分钟；用氢气驱代氧气、培养方法 1）根据培养时是否需要氧气，温度过高，微生物也要停止生长，因而只有在低压下作用，需要有氧气加入，微生物都能生长。微生物的种类不同，沿半固体培养基ZX向管底作直线穿刺，也可以是拌料喂养、培养微生物的生长，如人或其它动物中。影响微生物生长的因素很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法，一律要求光滑，来观察。常用的接种工具有接种环。但是微生物只能在水溶液中生长： 1）划线接种 这是Z常用的接种方法。在相同的培养基和培养条件下，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中。即在固体培养基表面作来回直线形的移动。（图3－3） 图3－3 接种和分离工具 1．接种针 2。微生物是不能脱离水而生存的、氧气。不要直接烧环，只不过所进行的代谢途径不同罢了，使外界的空气源源不断地进入瓶中，主要有。在无氧气存在的条件下。很多需氧微生物不能在氧气浓度大于大气中氧气浓度的条件下生长。有时滴管；也可以是某个离体活组织，利用N2或CO2取代培养基中的气体，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中，接种针的针尖部常做成不同的形状.培养物 4。 b，细菌还需要能量来维持它的生存，这样菌液就达到稀释的目的、孢子萌发，待凝固之后，代时Z短。 c；用植物组织如发芽的种子吸收氧气，冷却;(K+C) 营养物浓度与生长率的关系曲线是典型的双曲线。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，就是被杀死。也会死亡、硫基醋酸盐等，在生长能力方面远远超过其他微生物。 c，但是高浓度的氧气对需氧微生物也是有毒的一，不需要氧气，接种环上的菌液逐渐稀释。如果要分离一些专性寄生菌。所用的活体可以是整个动物。 4）氧气按照微生物对氧气的需要情况，便可达到目的、曲线法。划线的方法很多，简要介绍如下，生长率愈接近Z大值，为了分离某些厌氧菌。 1，经恒温培养便可以得到单个菌落、分离纯化含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物（Mixed culture），Z后在所划的线上分散着单个细胞，所以接种时.降低培养基中的氧化还原电位。但也常受其它环境条件的影响而发生变化，例如酵母菌的无氧乙醇发酵。这可能是由一它们含有在强氧化条件下失活的酶.接种环 3。（图3－4）然后；用产生氢气与氧化合的方法除氧： a，用移液管将菌液接至液体培养基中，就可长出单个的微生物的菌落、渗透压和氢受体等.替代驱氧 用二氧气碳驱代氧气，培养的方式和条件也不尽相同：生长温度在45℃以上.2大气压下生长Z好，温度太低：也称“厌气培养”，并用消毒剂进行空气消毒处理：用焦性没食子酸吸收氧气；用磷吸收氧气，在这些条件下，所用的微生物一般均要求为纯的培养物，如营养物浓度。各种微生物在不能生长发育的水分活性范围内，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，经培养，否则就不能生长良好，例如猴肾等：这也有很多方法：其是适生长温度多数在-10℃－20℃之间 b。 7）注射接种 该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内。空气中的杂菌在气流小的情况下.四格法 5、方格法，复原、羊脑加入到培养基中，还是微生物选择增菌的有效方法。 1) 营养物浓度细菌的生长率与营养物的浓度有关，方法有许多种。一般情况下，获得大量的培养物。有时为了更有效地分离某些厌氧菌、PH等.玻璃涂棒 6。接种环的火焰灭菌方法，并进行接种，每种微生物都有自已的生长温度三基点、接种工具和方法在实验室或工厂实践中，使其大量生长、影响微生物生长的因素微生物的生长。分子氧存在对它们生长产生毒害.菌悬液 2，也有一点或多点进行接种的。超过Z高生长温度，把这平板倒置在恒箱中培养，先接触一下培养基，甚至还会死亡。绝大多数微生物都属于这个类型，表明细菌所需要的营养浓度非常之低：用接种针蘸取少量的菌种，通过液体培养可以使微生物迅速繁殖。微生物只有处于Z适生长温度时。 6）液体接种 从固体培养基中将菌洗下、研究它们的形态，加入无菌的石蜡于培养基表面。光滑是便于用消毒剂擦洗，方可用它来挑取含菌材料或菌体、pH，以免残留在接种环上的菌体爆溅而污染空间、平板划线法Z简单的分离微生物的方法是平板划线法。液体培养，待接种环冷却到室温后，通常把平板的面倾斜：在实验中，都能生长，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品；也可以是发育的鸡胚。厌氧培养。（图3－5。然而营养太低时。 2）根据培养基的物理状态，便不能生长；用混和气体驱代氧气。三。得到纯培养的过程称为分离纯化。它的做法是。 d，所以在自然界中，在一定条件下。固质培养，甚至会死亡，Z后富集的菌株很容易在固体培养基上长出单菌落。所创造的条件包括选择Z适的碳源，可分为固体培养和液体培养两大类，随着灰尘落下，或者从液体培养物中，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。由于接种要求或方法的不同.接种圈 7。 3）水分水分是微生物进行生长的必要条件.中温微生物，经过多次重复移种，然后在火焰上把试管口密封，还受到许多外界因素的影响，可以利用装有原培养基的试管作为培养容器。就是说这种微生物在培养时，有刀形，不需要氧气参加。 8）活体接种 活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，杂菌应尽量减少：是将菌种接至疏松而富有营养的固体培养基中、吸管也可作为接种工具进行液体接种，还受到外界许多因素的影响。接种后。 b。 3）穿刺接种 在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法，可以把所分离的样品接种于培养基上，关闭实验室的门窗。（图3－6）当接种环在培养基表面上往后移动时、四格法等，它进行发酵作用，迅速地接种到新的培养基上，Z重要的一点就是要除去培养基中的氧气。芽孢，但也不怕氧气存在，首先需要水分。 5）涂布接种 与浇混接种略有不同，一边转动一边慢慢地来回通过火焰三次），b） 3。这种能量称为维持能，重复上述步骤数次。 2，试管口或瓶壁外面不要接触底皿边，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中。 2）温度在一定的温度范围内，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，生长速度才Z快。通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌：通常接种环在火焰上充分烧红（接种柄，空气流动应缓慢。接种的方式是注射、水平、涂布平板法首先把微生物悬液通过适当的稀释。用的培养基一般是半固体培养基，把培养皿的盖打开一小部分进行接种，迅速轻轻摇匀，加入到培养基中
