免疫印记检测法

检查原理：将混合抗原样品在凝胶板上进行单向或双向电泳分离， 然后取固定化基质膜与凝胶相贴。在印迹纸的自然吸附力、电场力或其它外力作用下， 使凝胶中的单一抗原组份转移到印迹纸上， 并且固相化。Z后应用免疫覆盖液技术如免疫同位素探针或免疫酶探针等， 对抗原固定化基质膜进行检测和分析。

免疫印迹（immunoblotting）又称蛋白质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。结合化学发光检测，可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异。

优点
免疫印迹法是一项分析抗原、抗体的技术。它具有下列优点：
1、 湿的固定化基质膜柔韧， 易于操作；
2 、固定化的生物大分子可均一的与各种免疫探针接近， 不会象凝胶那样受孔径阻隔；
3、 免疫印迹分析只需少量试剂；
4、 孵育、洗涤的时间明显减短；
5、可同时制作多个拷贝， 用于多种分析和鉴定；
6、结果以图谱形式可长期保存；
7、 免疫探针可通过降低PH值等方法， 象抹去录音磁带一样将探针抹掉， 再换用第二探针进行分析检测。免疫印迹法的应用范围及优点不仅局限于此， 它必将随着这一方法的深入研究而不断发展和完善。

免疫印记检测法(Western blot)，又称蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。
其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。
Western Blot显色的方法主要有以下几种：
i. 放射自显影
ii. 底物化学发光ECL
iii. 底物荧光ECF
iv. 底物DAB呈色
现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用diyi种方法，目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。