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关于免疫印迹western blotting的若干愚昧问题

richardcpx    2009-11-06    蛋白印迹仪    浏览 492 次

1.为什么一定要转膜,不能用SDS凝胶直接和抗体结合吗?
2.为什么用过一次抗体结合后,还要用抗抗体结合一次呢?不能就用一次抗体吗?
3.有没有一本专门讲述免疫印迹的书呢?
请回答的大侠务必提供参考资料哦。

精彩问答
沙漠之鹄 发布日期:2009-11-07
1. protein在凝胶里边是不暴露在外的,而是在凝胶内的。你要是切过DNA胶,你就能明白。所以要transfer到membrane上以使其暴露于抗体;
2. 一抗制备,比方说兔子吧,你先给兔子喂一些你想要probe的蛋白,兔子就对这外源蛋白起免疫反应了,就产生抗体了。然后你让兔子流血,从血里边提取抗体。这个就叫一抗。这个一抗是和你要probe的蛋白特异性结合的,没错吧。但是你怎样用你自己的眼睛来看这个特异性识别呢("显色")。这就需要二抗了。二抗就能和一抗特异性结合(一般要是兔子产的一抗,就用anti-兔子的二抗;老鼠的就用老鼠的。)为啥二抗能显色,take home for you, 就是想想为啥二抗会显色^^; 总之,一抗是和靶蛋白特异性结合;二抗和一抗结合以此来显色。
3. 你看wiki就足够了(英文版)。
全部评论
yuzmzz 发布日期:2009-11-20
你这问题就像你不是学生物学的一样呵呵
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