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如何分离纯化清蛋白、球蛋白、胶蛋白、谷蛋白

YUANBAO520418    2016-09-24    蛋白质纯化系统    浏览 917 次

精彩问答
Ameiy2011 发布日期:2016-11-21
你可以参照蛋白的分级制备分离,但不一定是纯的蛋白,我看好多资料显示都采用的osbrone分级方法,其中分离醇溶蛋白的有机溶剂略有不同,以下是其中一篇的方法,你可参考以下:
4.1 原料的预处理
苦养粉加入正己烷,室温下脱脂12h,其间换正己烷数次,脱脂后将苦养粉置于通风橱中风干48h,然后把脱脂后的苦荞粉装入具塞试剂瓶中,置于冰箱4"C保存备用。
4.2 苦养麦蛋白质组分的分级制备
清蛋白 取100g脱脂苦荞粉.加入到蒸馏水中(料水比为l:10),室温下搅拌提取lh,然后4"C,10000r/min离心20min,收集上清液,沉淀重复提取一次,离心,上清液合并后浓缩,冷冻干燥所得产品即为清蛋白组分.
球蛋白 清蛋白提取后的沉淀加入到Imol/L NaCI中(料水比为1:10),室温下搅拌提取lh,然后4"C,10000r/min离心20min,收集上清液,沉淀重复提取一次,离心,上清液合并后于4"C透析(MWCO :8000-10000Da)48h,其间换水数次,然后离心获得沉淀,沉淀冷冻于燥后即为球蛋白组分。
醇溶蛋白 球蛋白提取后的沉淀加入到55%(v/v)正丙醇中(料水比为l:10),室温下搅拌提取lh,然后4"0,10000rlmin离心20min,收集上清液,沉淀重复提取一次,离心,上清液合并后旋转蒸发浓缩,然后冷冻干燥,所得产品即为醇溶蛋白。
谷蛋白 醇溶蛋白提取后的沉淀加入到0.05mol/LNaOH中(料水比为1:10),室温下搅拌提取lh,于4"C,10000r/min离心20min,收集上清液,沉淀重复提取一次,离心,上清液合并后加入三至Z终浓度lOOg/L,然后4℃,10000r/min离心10min,沉淀用冷丙酮洗涤两次,室温下风干,所得产品即为谷蛋白。
蛋白质含量的测定采用微量Kieldahl定氮法,定氮系数为6.25。
全部评论
kbbdnju30015 发布日期:2016-09-25
可以选用凝胶电泳,根据带电性不同进行分离纯化。
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