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蛋白析出问题

小哥他哥们儿    2010-06-09    蛋白质纯化系统    浏览 533 次

我的是HIS标签蛋白,超声裂解菌体后12000离心,SDS-PAGE检测目的蛋白大量存在于上清,于是按可溶性蛋白镍柱纯化,纯化出以后室温放置一段时间或是放于-20拿出后蛋白析出,而且一直溶解不回去。后来,将沉淀蛋白用8mol尿素溶解也不行。请教各位,给分析下,谢谢... 我的是HIS标签蛋白,超声裂解菌体后12000离心,SDS-PAGE检测目的蛋白大量存在于上清,于是按可溶性蛋白镍柱纯化,纯化出以后室温放置一段时间或是放于-20拿出后蛋白析出,而且一直溶解不回去。后来,将沉淀蛋白用8mol尿素溶解也不行。请教各位,给分析下,谢谢。

精彩问答
汉共操耗侄障说 发布日期:2010-06-10
看起来是构象不正确,可能是折叠或修饰的问题。如果只要求可溶,纯化后稀释一下,也许就不沉淀了。也可以试试加一些稳定剂,如甘油,DTT,分子伴侣等。
如果要正确折叠的,就比较麻烦,可以用真核表达系统试试。Thermo有一种用人细胞裂解液表达的系统,自称修饰系统很好。
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