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opc级别引物做rt-pcr怎么样

器会汐er9    2016-09-27    基因扩增仪    浏览 467 次

精彩问答
fwjb4naio 发布日期:2016-09-28
  是做反转录还是real time PCR?
  反转录的话,可以用oligoT做反转录的引物,得到全部的cDNA,然后再利用特异性的引物去扩增出目的基因。或者直接用特异性的引物去反转录出来目的基因的cDNA,然后再进行PCR扩增。
  引物设计的话,跟平常的引物设计应遵循的原则差不多。不过由于是扩增目的基因的coding sequence,所以引物设计的时候只能从coding sequence的两端设计,这样才能得到全长的目的基因。设计时,除了要与cDNA互补的一段外,还需要另外添加Kozac序列和酶切位点序列以及保护碱基,这样扩增出来的PCR产物就可以直接进行酶切连接,连入相应的载体上了。
  real timePCR的话,同样根据需要扩增的片段设计引物就行了,没有位置的限制。
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