离子交换色谱(IEC)因吸附量较大,被广泛应用于血浆蛋白的粗纯工艺。但是IEC容易受到样品中盐浓度的影响,如果样品溶液中含盐,则除了过滤以外,还需要进行脱盐、透析等前处理。而另一方面,近几年市面上出现了一种不易受到盐浓度影响的耐盐型(salt-tolerant)离子交换填料,可以作为一种混合模式填料用于这类纯化应用。
最近发表在期刊《Biotechnology Journal》上的一篇文献中,研究人员使用了东曹的耐盐型阳离子交换填料TOYOPEARL Sulfate-650F,从凝血酶原复合物浓缩液(PCC)中有效纯化凝血因子Ⅸ(FactorⅨ;九因子)。
文献介绍
M. Begić et al., Salt-tolerant cation-exchanger containing sulfate groups as a viable alternative for mixed-mode type and heparin-base affinity resin, Biotechnol. J., 2021; 2100100, CC BY NC ND, https://doi.org/10.1002/biot.202100100
与以磺酸基为官能团的阳离子交换填料TOYOPEARL GigaCap S-650M和SP-650M相比,耐盐性更高的TOYOPEARL Sulfate-650F则是导入了硫酸酯基作为官能团。
为了研究磺酸型填料和硫酸酯型填料的耐盐性,作者使用了以上这3种具有代表性的阳离子交换填料。首先,使用溶菌酶考察了洗脱液的pH和盐浓度对吸附量的影响。结果表明,携带硫酸酯基的TOYOPEARL Sulfate-650F对盐浓度的依赖性有很大不同,在更高盐浓度下也具备吸附能力(参照FIGURE2)。导致该现象的原因可能是,在硫酸酯型填料中,官能团的S原子和基质的碳原子之间是-O-,那么与磺酸型的-CH2-相比,其疏水性会变高,所以具备了耐盐性。
凝血因子Ⅸ的纯化
下图是使用耐盐型阳离子交换填料TOYOPEARL Sulfate-650F分离PCC中的维生素K依赖性凝血因子的结果。
首先,使用含有0.4 mol/L NaCl的高盐浓度洗脱液,让吸附较弱的凝血因子Ⅱ、因子Ⅶ、因子Ⅹ不被填料吸附直接流穿。然后,通过降低盐浓度和提升pH的阶梯梯度洗脱,把吸附在柱子上的因子Ⅸ洗脱下来。使用Sulfate-650F无需对样品进行脱盐处理,即可获得与使用肝素亲和层析相同纯度的因子Ⅸ。
工艺开发和筛选用预装柱
在工艺开发早期阶段需要进行制备填料的筛选和分离条件探讨/优化,东曹SkillPak预装柱预装填有亲和、阴/阳离子交换、疏水以及尺寸排阻等各种分离模式的TOYOPEARL层析填料。
1 mL和5 mL的SkillPak预装柱主要用于纯化工艺开发或变更时参数和方法的优化。50 mL和200 mL规格的预装柱可将开发好的纯化工艺线性放大。我们还提供耐盐型离子交换填料套装,其中包含TOYOPEARL NH2-750F和Sulfate-650F两种填料产品。
参考文献:
1. T. Burnouf, An overview of plasma fractionation, Annals of Blood, 2018, 3: 33
2. J. M. Bult, Plasma fractionation technologies: benefit and limitations, September 21, 2021
3. M. Begić et al., Salt-tolerant cation-exchanger containing sulfate groups as a viable alternative for mixed-mode type and heparin-base affinity resin, Biotechnol. J., 2021; 2100100, CC BY NC ND
本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断。 鸡凝血因子V(F5)ELISA检测试剂盒使用说明书【鸡凝血因子V
人凝血因子Ⅷ相关抗原(Ⅷ-Ag)ELISA试剂盒本生生物公司供应:ELISA试剂盒,血清,荧光定量PCR耗材
本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断。 鸡凝血因子V(F5)ELISA检测试剂盒使用说明书 【
阳离子纱线 是不是比普通涤纶的强度要低,大概低百分之多少,两者还有其他性能上的差别? 阳离子就是两种不同
阴离子放电顺序S2-,I-,Br-,Cl-,OH-,含氧酸根,F-。 阳离子放电强弱顺序与金属活动顺序表相
高中课本上说:阳离子交换膜具有很好的选择性,它只允许阳极室的Na+、H+透过离子交换膜进入阴极室。 那么,
如何自制阳离子交换膜? 离子交换膜是对离子具有选择透过性的高分子材料制成的薄膜,阳离子膜通常是磺酸型的,
制备去离子水时,让水通过阳离子交换树脂,阳离子被交换,阴离子流过,也就是说阴离子可以通过阳离子交换树脂;电
多离子浸泡液泡水泥试块,测多阳离子对氯离子的扩散的影响,阳离子有钠钾镁钙,阴离子只有氯离子,因为是多离子,
安谱实验带您体验您心中的那片田园,那片田一起走进 HJ 889-2017,三氯化六氨合钴浸提-分光光度法测定土壤