Vi-CELL BLU细胞计数仪在工程细胞株开发中的特点和优势

工程细胞株开发（Cell Line Development: CLD）的主要目的是通过高通量筛选手段获得数个高产稳定表达的细胞株，为后续的工艺开发及优化提供基础。能否构建适合于生产的高表达稳定细胞株，将直接影响后期重组蛋白或单克隆蛋白等药物的开发效率和生产成本。

细胞培养是细胞株开发的基础，无论是细胞转染、高通量克隆筛选、培养基优化、还是抗体表达，都需要在细胞培养的基础上完成细胞生长状态的检测，其中包括活细胞密度（VCD）和活率（Viability）检测。通过检测结果将细胞密度和活率达不到要求的细胞排除掉。最 终，从数以千计的克隆细胞中筛选到稳定高产的单克隆细胞株。

由于要筛选的克隆细胞量很大，对所培养的细胞生长状态的检测，通常需要使用高通量分析设备，有时甚至结合移液工作站来完成自动化检测。譬如，使用96孔板检测细胞密度和活率，同时根据需要可整合自动化移液工作站，从而大大提高筛选分析通量，并实现测试的标准化，减少人为操作误差，最 终使我们能在有限的平台基础上实现高产细胞株的筛选。

贝克曼库尔特生命科学的Vi-CELL BLU全自动细胞计数和活率分析仪就是这样一款满足高通量上样、全自动检测，并可与自动化移液工作站整合的分析仪器。它具有以下一些优点满足细胞株开发过程中对克隆细胞的VCD和Viability准确和快速地检测。

96孔板上样检测

Vi-CELL BLU全自动细胞计数仪除了可以使用24位转盘做不间断检测外，同时可以采用96孔板进行高通量样品分析测试（如下图所示），使用配套的封板膜可以减少检测过程中样品的挥发，防止待测样品受到外部环境的污染，对于有生物安全的细胞样品，也可降低对操作人员的危害风险。

Vi-CELL BLU 96孔板检测照片

和移液工作站整合

为了解决那些重复操作、通量高、易污染、需要大量人力操作的实验步骤，如梯度稀释、细胞培养、细胞换液、高通量筛选、克隆挑选等步骤，从而使得上游更通畅，并保证数据的完整性，可以使用贝克曼库尔特Biomek系列自动化移液工作站来完成这些工作。

那细胞计数和活率分析操作是否也可以整合进来，让自动化工作站控制完成相关检测呢？答案是可以的。Vi-CELL BLU细胞计数仪可通过OPC UA Server和自动化移液工作站实现有效地整合，进一步实现细胞计数和活率分析检测的自动化目的，避免无谓的重复实验操作。

Biomek自动化移液工作站整合Vi-CELL BLU细胞计数仪的彩页

全自动和标准化分析

使用96孔板的高通量细胞计数和活率分析时，可以在Cell Type检测参数表中设置染色前的吹打混悬次数（Aspiration cycles）和染色混合次数（Mixing cycles），以此让仪器自动对沉降的细胞吹打均匀。然后，在保证细胞样品均一性的前提下，吸取等体积台盼蓝吹打完成细胞的均匀染色。最 后，再通过Cell Type中的细胞识别参数，对拍摄得到的细胞进行有效地识别分析。检测结束后仪器自动对管路清洗，接着仪器自动对下一个样品进行标准化分析。

Cell Type参数表

单个样品的百图分析

每个细胞样品按默认Cell Type方法检测可以得到100张细胞照片，相比于其他细胞计数仪的拍摄1张、3张或6张照片，同一样品拍摄100张照片得到的细胞数更多，因而该细胞计数方法的系统偏差更小，测试结果的代表性更好。

CHO细胞第59张照片（共100张）

同一焦平面下的细胞直径检测

细胞培养过程中平均直径的监测通常会被忽略，同时这也是一个不太容易被细胞计数仪检测准确的参数，但这个直径参数有时影响会很大。

在细胞转染病毒或质粒后，一般细胞平均直径会发生变化。有客户发现在Fed-Batch培养过程中细胞平均直径有时会过大，从而可能因为不耐受培养过程中的剪切力，最 终导致Peak-VCD相对其他细胞更低。

Vi-CELL BLU全自动细胞计数仪通过使用聚焦质控品完成自动对焦（如下图所示），之后细胞样品检测都在同一焦平面下完成。然后通过检测L10粒径质控标样的平均粒径结果是否在标称值±10%范围内，以此判断自动对焦好坏。同时，可把L10粒径质控品作为质量控制标样，定期监测仪器对焦状态是否正常，以此保证所有的细胞样品都是在同一焦平面下检测，提高细胞平均直径检测的准确性。

聚焦质控品和仪器自动对焦示意图

同一个CHO细胞三次测试结果（考察细胞密度、活率和直径的重复性）

若您希望更多地了解Vi-CELL BLU全自动细胞计数和活率分析仪，请拨打400-821-8935和我们联系。

*本产品仅供工业和科研使用，不用于临床诊断

01

如何提高细胞计数和活率分析的准确性？

姚金龙

贝克曼库尔特高级应用专员

讲座简介：

在各种细胞计数和活率分析方法中，台盼蓝染色细胞计数无疑是细胞活率分析的金标准。
目前，通过台盼蓝染色分析细胞活率的方法包括：传统的光学显微镜+血球计数板法，也有市场上很普遍的插片式半自动细胞计数仪，以及无需手动混匀和染色的全自动细胞计数和活率分析仪。其中，后两个分析仪器的出现，不仅很大程度地解放了人力，同时相比于显微镜+血球计数板法会更省时，更合规，所以被各大制药企业所使用。而全自动细胞计数和活率分析仪更是在工艺开发和生产质控方面表现出特有的优势，即减少了人为的样品吹打混匀和台盼蓝染色操作误差，而且每种细胞标准化的测试条件，提高了仪器间数据的一致性而广受欢迎。
但是大家在使用这些仪器一段时间后，可能会遇到这样一些问题，譬如：自动细胞计数仪的测试结果为何有时和血球计数板的结果对不上，我该相信哪一个？细胞计数仪测试标样没有问题，但一检测细胞怎么就不行了呢？为何同样都是CHO细胞，同事测试结果是符合预期的，我的为何就不行呢？
以上问题其实归结一下都是我们测试结果的准确性的问题，如何减小测试方法的人为误差？如何提高我们使用的细胞计数和活率分析仪的测试结果的准确性？这些问题都将在此次讲座中和大家一起来探讨交流。

02

高产稳定CHO细胞株构建策略

刘玉梅

上海复宏汉霖生物医药有限公司高级研究员

讲座简介：

探讨影响稳定细胞株构建要素，包括载体，宿主细胞等。基于平台优化筛选方式，在stable pool基础上结合高通量技术进行稳定细胞株筛选，分享快速开发案例，实现快速、高效、稳定细胞株筛选。

氮吹仪的优点在于，一次可处理多个样品，在多因素、多水平的重复实验中优势更为明显，实验操作简洁、灵活。可以不受约束地随时调节浓缩的进程，实验中不需要操作者长时间的维护，节省人力，氮吹仪在浓缩时准确、灵敏可避免样品损失。
 

氮吹用于气相、液相及质谱分析中的样品制备。它采用国际认可技术，通过将氮气吹入加热样品的表面进行样品浓缩。该方法具有省时操作方便、容易控制等特点，可很快得到预期的结果。该技术采用固相萃取前处理技术代替传统的液相萃取和层析技术，使样品得到迅速分离、净化。用氮吹代替常用的旋转蒸发仪进行浓缩，使分析时间大为缩短。
 

氮吹仪采用惰性气体对加热样液进行吹扫，使待处理样品迅速浓缩，达到快速分离纯化的效果。该方法操作简便，尤其可以同时处理多个样品，大大缩短了检测时间。被广泛应用于农残检测，制药行业、环境监测和通用研究中的样品批量处理。
 

氮吹仪按照加热方式可分为干式氮吹和水浴氮吹仪，水浴氮吹仪可分为方形水浴氮吹仪，圆形水浴氮吹仪，全自动氮吹仪。
 

全自动氮吹仪：用水来加热，可自动补水，定时定浓氮吹仪，  报警功能(开盖、浓缩完成、水浴水量或氮气压力不足) 整机，不用放在通风柜里面！
 

定浓：配有专门的光学传感器，自动、独立地检测终点。当样品吹扫到指定容量，自动停止
 

定时：设定时间，到点停止
 

定浓定时：设定时间和容量，到点停止。

玻璃器皿清洗机是通过现代化的洗涤方式，将不同形状的玻璃器皿，如：培养皿、玻片、移液管、色谱瓶、试管、三角瓶、锥形瓶、烧杯、烧瓶、量筒、容量瓶、西林瓶、蓝盖瓶等。通过不同的篮架装载在一个密闭的清洗空间里面，利用先进的软件编程技术、水处理技术、化学试剂配方、温度感应技术、热风干燥技术，自动完成预洗、清洗、中和洗、漂洗、消毒和干燥等清洗步骤。

人工清洗或者手持工具进行刷洗或清洗，劳动强度大，主观因素影响大，质量难以做到均衡以及稳定。玻璃器皿清洗机大大降低了操作者的感染风险及劳动强度，节约了人力和时间，同时减少了对环境的生物污染。

与传统的洗瓶机比较，它的耗能、耗水、占用空间等减少80%以上，同时它对环境的污染也很少，维护方便，所以运行的费用也很低。冲水系统设计有水循环和过滤装置使冲水能循环使用,减少能耗。冲瓶喷头的工作方式设计有一种固定式和两种可随动升降式供顾客选择,冲瓶工艺合理，残留液少。操作简单，设有多种安全保护装置，确保操作者及设备的使用安全。

在化学和制药实验室中，玻璃器皿的广泛使用伴随着产生多种潜在的污染物，这对于清洗剂和清洗方法是一个严重的挑战。在使用中，清洗剂必须是有效的和可靠的，但同时不能留下任何残余物。所以玻璃器皿清洗机就有了用武之地。

应用领域：政府性质的实验室：质检、法医、商检、疾病预防控制ZX、环境监测站、食品药品监督管理局等；企业性质实验室：食品、化妆品，生物制药、化工、奶制品、石化等。

青岛富勒姆为您推荐，FLOM全自动玻璃器皿清洗机—FL260

巧夺天工的设计：

·外部材质，304不锈钢；内舱舱体、内门开模，为316L不锈钢，边角做钝化处理，无焊接点、无缝隙、无拼接点，避免漏水、杂质沉淀及细菌的滋生。

·内舱两侧隔层中各配一个蒸汽冷凝器，且两侧版面为316L不锈钢材质，避免水箱加热产生的饱和水蒸气外排污染室内空气，并回流到排水管道。

·舱门为ESL电控自动电子安全门锁功能（开门停机），开门时需要暂停或退出程序，防止误开门操作，避免造成蒸汽伤害。

·科学的排水设计，保证舱室洁净无死角，避免二次污染。

（内容源于网络）