1、新鲜硬组织取材固定(以牙齿为例):
根据材料尺寸/性质,通过切割机获得所需样本,再使用4%多聚甲醛或10%福尔 马林溶液固定至少24小时;
2、脱水浸润:
酒精上行脱水:无水乙醇:7200=1:1;
无水乙醇:7200=3:7; 7200原液I、II;
3、样本包埋
光聚合法包埋:7200原液+固体包埋颗粒(12小时);配合真空冷镶嵌机进行抽真空,放置模具自动灌胶,去除气泡,修复包埋样本
4、粘接样本块至载玻片
采用T4000树脂粘接,并注意液体比例,配合压合台确保粘样均匀
5、切割出目的切面
利用真空吸盘固定,采用切割机对包埋块进行切割,使其暴露出目的切面
6、目的切面打磨抛光
通过真空吸盘固定包埋块,配合磨片机对目的切面进行打磨抛光
7、粘接平行平面
利用光固化技术,配合压片装置将平行载片添加到已经过抛光处理的目的切面
8、切割获得组织切片(厚)
使用切割机及真空吸盘再次对载片进行分离切割,此处可获得厚度约100微米的(厚)切片
9、磨片至所需厚度
使用磨片机对(厚)切片进行最 终磨片,使用砂纸作为介质,实时检测磨削量,得到最 终的薄片(<10μm)
10、染色封片
HE染色、甲苯胺蓝染色、Ladewig染色法等对切片进行染色,中性树胶封片
11、组织切片显微观察
可使用生物显微镜进行显微图像采集拍照
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