如何运用BLS细胞融合仪及胚胎聚集针创建胚胎
注射器内吸入培养基,在35mm组织培养板上微滴(大致直径3mm)点样成若干行(列)向培养板内小心注入石蜡油使其覆盖整板,注意不要使石蜡油直接倾倒在微滴上石蜡油很容易越过这些微滴石蜡油的量要完全覆盖这些微滴使用配件按照说明操作,制作凹陷
37度,5%CO2条件下孵育培养板几小时,目的是让培养基在液滴内达到平衡这一步可以在形成凹陷的步骤之前进行
实验前准备好待聚集的细胞,组织或胚胎,不要将它们长时间暴露在室温下或脱离Z适培养条件时间过长通过在组织培养板盖上加入几滴M2培养基和Tyrodes酸溶液来去除卵透明带将组织培养板的培养区域表面如此处理后,胚胎将本能的黏附在表面因此我们需要使用盖确认所有培养基溶液和酸液都接近室温将胚胎放置在一滴M2培养基上取尽可能少的内含10-20个胚胎的培养基,并移到一滴酸液上重复这个步骤并将胚胎移到新的一滴酸液上让胚胎在吸头内保持上下移动,观察卵透明带是如何溶解的迅速将胚胎移入M2培养基用几滴培养基溶液洗涤并移入刚才制成的凹陷中
胚胎培养条件是聚集产量的一个重要因素,因为胚胎要培养过夜,如果是四倍体胚胎在移入母体前需要培养48小时在培养的每个细节都必须小心操作控制这包括温度,大气,培养基,室温操作时间及矿物油质量 BLS细胞融合仪 胚胎聚集针 胚胎聚集针
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