吐温降解分析难？安捷伦专用柱方案高效破局！

聚山梨酯 (PS，吐温) 作为非离子表面活性剂，对治疗性蛋白药物的稳定性起着至关重要的作用。聚山梨酯是异质的混合物，容易通过多种途径发生降解。聚山梨酯的降解不仅降低了表面活性剂的有效浓度，而且还与可见异物/不溶性微粒的形成有关，影响了药品有效性和安全性。

图 1. 抗体制剂中吐温降解通路与可见异物/不溶性微粒风险示意图

聚山梨酯两个主要降解途径是氧化降解和酶水解。酶水解已被公认为高浓度抗体制剂中吐温降解的主要途径，因为宿主细胞蛋白（HCP）中的脂肪酶、酯酶等可以在酯键处裂解聚山梨酯，高浓度制剂会增加可水解聚山梨酯的宿主细胞蛋白的浓度。不同途径之间的降解模式有显著的不同，降解产物的种类可提示降解作用机制。游离脂肪酸（FFAs）是 PS 的主要水解产物，其中难溶的 FFAs 容易沉淀成颗粒，从而降低制剂的稳定性。氧化的降解产物包括过氧化物、醛、酮、脂肪酸酯和游离脂肪酸，其中游离脂肪酸为次要降解产物。

方法难点

随着监管要求的日益严格和行业意识的提升，在开发的早期阶段进行更全面的表征分析至关重要。 但是，使用传统的 C18 或 C8 HPLC 柱可能难以将游离脂肪酸与聚山梨酯单酯分离，通常需要超过 30 分钟才能达到基线分离。混合模式色谱柱无法有效进行此类分析，因为它们无法保留聚山梨酯的降解产物，这些降解产物在死体积内就会被洗脱。

理想情况下，这种额外的检测方法应易于实施，提供易于解读的数据，实现全面的表征，并尽可能提高通量。

安捷伦高通量应用方案-AdvanceBio 表面活性剂色谱柱

AdvanceBio 表面活性剂分析生物色谱柱在设计时充分考虑了聚山梨酯类分析的痛点，自发布以来，其高性能广受客户好评。现已经广泛应用于表面活性剂的水解与氧化分析。

在实际应用中，AdvanceBio 表面活性剂分析 HPLC 柱表现出以下多维优势：

更高分离度：可更清晰地分离降解产物峰；

更短分析时间：压缩至 10 分钟，可显著提升样品通量；

更高效率：可更早发现降解趋势，提升质量控制；

更环保：可减少溶剂使用，同步降低运营成本。

应用案例

案例一：通过 LC/ELSD 表征聚山梨酯组分

由于聚山梨酯缺乏发色团，因此可以使用通用检测器（例如蒸发光散射检测器 (ELSD)）进行检测。将 PS 20 和 PS 80 以 100 ppm 加标至制剂缓冲液中，将油酸以 10 ppm 加标至制剂缓冲液中，将月桂酸以 5 ppm 加标至制剂缓冲液中，进行重现性和残留研究。

新方法能够提供有关聚山梨酯完整性更详细的信息，游离脂肪酸与聚山梨酯单酯峰完全分离。采用该耗时 10 分钟的方法时，为聚山梨酯水解提供了一种高效的筛查工具。

案例二：通过 LC/MS 简化聚山梨酯氧化副产物的筛查

使用 AdvanceBio 表面活性剂分析 HPLC 色谱柱、Agilent 6546LC/Q-TOF 系统、Agilent MassHunter 定性分析软件 12.0 和 PolyMatch 软件鉴定聚山梨酯氧化标志物。

将聚山梨酯 80 与 3% (w/v) 过氧化氢在 40°C 水浴中孵育过夜。在氧化样品的色谱图中，单酯、二酯和三酯洗脱位置处的信号降低以及色谱图前面一段信号略微增加，表明存在一定程度的降解。

结语

新 Agilent AdvanceBio 表面活性剂分析 HPLC 柱的方法优点能够提供有关聚山梨酯完整性更详细的信息，以及识别宿主细胞蛋白残留的关键因素，从而开展进一步调查。

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