人类白细胞抗原C(HLA-C)酶联免疫分析

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上海基免实业有限公司更新于：2015-01-23

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人类白细胞抗原C(HLA-C)酶联免疫分析药品名称：通用名：人类白细胞抗原C(HLA-C)酶联免疫分析试剂盒使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人类白细胞抗原C(HLA-C)含量实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人类白细胞抗原C(HLA-C)水平用纯化的人类白细胞抗原C(HLA-C)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人类白细胞抗原C(HLA-C)，再与HRP标记的HLA-C抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色颜色的深浅和样品中的人类白细胞抗原C(HLA-C)呈正相关用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人类白细胞抗原C(HLA-C)浓度试剂盒组成 1 20倍浓缩洗涤液 30ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶 2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（180g/L） 0.5ml×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验若不能马上进行试验，可将标本放于-20保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性操作步骤标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在**第二孔中分别加标准品100l，然后在**第二孔中加标准品稀释液50l，混匀；然后从**孔第二孔中各取100l分别加到第三孔和第四孔，再在第三第四孔分别加标准品稀释液50l，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50l弃掉，再各取50l分别加到第五第六孔中，再在第五第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五第六孔中各取50l分别加到第七第八孔中，再在第七第八孔中分别加标准品稀释液50l，混匀后从第七第八孔中分别取50l加到第九第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50l，混匀后从第九第十孔中各取50l弃掉（稀释后各孔加样量都为50l，浓度分别为120g/L，80g/L ，40g/L，20g/L， 10g/L）加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）待测样品孔在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40l，然后再加待测样品10l（样品Z终稀释度为5倍）加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀温育：用封板膜封板后置37温育30分钟配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干加酶：每孔加入酶标试剂50l，空白孔除外温育：操作同3 洗涤：操作同5 显色：每孔先加入显色剂A50l，再加入显色剂B50l，轻轻震荡混匀，37避光显色15分钟. 终止：每孔加终止液50l，终止反应（此时蓝色立转黄色）测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）测定应在加终止液后15分钟以内进行

内容节点: 概述; 实验/设备条件; 样品提取; 实验/操作方法; 实验结果/结论; 仪器/耗材清单

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