使用高分辨率 LC/MS 对两种利妥昔单抗生物仿制药的完整质量数、亚基质量数和游离多聚糖进行比较研究

近年来，由于多种高利润的原创生物制剂的ZL保护期满，生物仿制药单克隆抗体(mAb) 的开发和生产迅速增长。尽管不存在有关生物仿制药的监管标准，但是业界一致认为生物仿制药应当：(i) 与原创生物制剂具有高度生物物理和生物化学相似性，并且 (ii) 在纯度、效价和安全性方面具有可比性。美国 FDA 等监管机构指出，可以使用高质量分析数据来证明范围较窄的体内研究的合理性，强调了全面的高分辨率分析表征的重要性。

与小分子药物不同，mAb 极其复杂，难以实施完整的分析表征。因此，生物制药公司将确定一组需要监测的关键质量属性 (CQA)，选择 CQA 的原则是它们对生物制剂的整体质量、安全性或有效性具有重大影响。由于同一工厂可能生产多种ZL药物，因此 mAb 身份（鉴定）是一种 CQA，其Z有效的测定方法是完整蛋白质质谱法。此外，糖基化通常也被视为一种 CQA，因为非人类多聚糖基序可能触发急性或慢性过敏反应。另外，由于 mAb 由培养的细胞产生，而多聚糖对培养条件的变化非常敏感，因此它们是生产工艺发生非预期变化的有用的指标。

本应用分析了两种利妥昔单抗生物仿制药的完整质量数、亚基质量数和糖基化，并将它们与创新药物分子进行了比较。我们使用四种不同的工作流程进行分析：(i) 完整 mAb，(ii) 还原态亚基，(iii) IdeS 酶解的亚基，以及 (iv) 游离多聚糖。在这些工作流程中，样品前处理时间各不相同，有的无需样品前处理（完整 mAb），有的需要大约三个小时（游离多聚糖）。包含更多样品前处理步骤的工作流程的优势通常在于对低丰度多聚糖组分具有更高的灵敏度，从而提高了相应技术的分析能力。

结果表明，由 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统和 Agilent 6545XT Q-TOF 组成的安捷伦高分辨率 LC/MS 非常适合执行这些分析。此外，利用 AssayMAP Bravo 自动完成游离多聚糖工作流程中的样品前处理，从而减少人为错误并缩短样品前处理时间。标记多聚糖可在小样品量中以高浓度洗脱，无需冗长的干燥步骤。