【阿拉丁】免疫印迹膜剥离和重新检测

【概述】

免疫印迹是研究蛋白质功能和定位的常用技术。通常，蛋白质样品可在SDS-PAGE上分离并转印至硝酸纤维素膜(NC膜)或PVDF膜上，然后用特异性抗体进行检测。与可重复利用Southern和Northern印迹的核酸技术不同，免疫印迹很难重复使用。

【实验/设备条件】

通过加热和去污剂剥离

• 标准印迹或印迹条，在硝酸纤维素或PVDF膜上。

• 封闭液。

• 剥离溶液：100 mM 2-巯基乙醇 (M301574)、2% (w/v) SDS (S108346)、62.5 mM Tris-HCl (T105291), pH 6.7。

• 磷酸盐缓冲盐（PBS）：10 mM 磷酸钠、pH 7.2，0.9%（w/v）NaCl。

• 浅托盘，能容纳膜

• 阳性和阴性剥离对照。

【样品提取】

【实验/操作方法】

1.   在通风橱内，将印迹放入剥离溶液中，50 °C摇动孵育30分钟。

2.   将印迹放入缓冲液中，摇动10分钟。使用新鲜的缓冲液重复一次。

3.   可选: 重复初始检测操作（省略一抗步骤），

4.   以确保抗体已失活或从膜上剥离。

5.   将印迹放入缓冲液中，摇动10分钟。

6.   继续进行封闭步骤，进行下一轮的免疫检测。

【实验结果/结论】

1.   有利于昂贵或量少或珍稀样本的多次杂交；

2.   有利于用不同抗体分析单次印迹上的不同蛋白，比如不同亚型的抗体；

3.   有利于对异常结果进行重分析或确认；

4.   有利于纠正孵错的抗体；

5.   节约试剂成本，并节约时间。

【仪器/耗材清单】