饲料中的氨基酸检测方法

饲料中的氨基酸检测方法

仪器及试剂

仪 器

1). 天平一台（精度0.1mg）；

2). 恒温水浴锅一台；

3). 容量瓶；

4). 试管（1.5×15cm或1.5×10cm）；

5). 微量进样器（5ul或10µl）一支；

6). 微量可调移液枪（1000ul）一支、吸头多个；

7). 旋涡混匀器一台；

8). HPLC系统及氨基酸分析专用柱（4.6×250mm）；

试剂

1). 超纯水（≥18MΩ∙cm）；

2). 乙腈（HPLC级）；

3). 三水合醋酸钠（分析纯）；

4). 冰醋酸（分析纯）；

5). 衍生试剂A和衍生试剂B溶液，至于冰箱保存（衍生试剂包对身体有害，用时请做好防护措施）；

6). 正己烷（HPLC级）。

二、样品制备

准确称取饲料10-50 mg，置于25 ml塞比色管中，加1.0 mol/L盐酸10 ml搅拌提取15 min，静置10分钟，将上清液过滤到100 ml量瓶中，残渣加1.0 mol/L盐酸10 ml搅拌3 min，重复提取两次，合并上清液，收集滤液并加1.0 mol/L盐酸定容至刻度，摇匀。

三、流动相的配制

流动相A： 0.1mol/L醋酸钠溶液（pH 6.5）：乙睛＝93：7

配制方法：准确称取三水合醋酸钠13.6g于1000ml水中，搅拌均匀，使之溶解，用冰醋酸或氢氧化钠溶液调pH值至6.5；准确量取配制好的三水合醋酸钠溶液465ml和乙腈35ml，混合均匀，抽滤过0.45µm滤膜；  

流动相B：水：乙腈＝20：80

配制方法：准确量取水100ml和乙腈400ml，混合均匀，抽滤过0.45µm滤膜；