重组结核分枝杆菌Mr 38 000蛋白的表达纯化和鉴定

从H37Rv基因组中扩增Mr38 000 蛋白基因并GX表达和纯化用PCR技术从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增Mr 38 000蛋白序列，将其与pGEM-T-Easy 载体连接转化E.coli DH5，构建重组克隆载体pGEM-T-Easy/ Mr 38 000，测序正确后将目的基因片断克隆入pQE-80L原核表达载体并转化E.coli DH5，IPTG诱导目的蛋白表达 经Western-blot 鉴定目的基因与(His)6融合表达，将已表达的蛋白质通过Ni-NTA亲和色谱柱进行纯化PCR得到结核分枝杆菌Mr 38 000蛋白基因，测序结果与GeBank 中报道的完全一致SDS-PAGE显示， 在Mr为38.5×103处有相应的蛋白质表达条带，Wesern blot鉴定为(His)6融合表达蛋白经Ni-NTA亲和色谱柱进行纯化后可得到纯化的蛋白成功克隆了铁调节蛋白基因Mr38 000 蛋白序列，并在E.coli DH5GX表达，亲和层析后获得了纯化目的蛋白 超声波清洗机