
- 2025-01-10 10:50:30色谱柱污染 现象
- 色谱柱污染是色谱分析中常见的问题,主要由样品中的杂质、流动相中的污染物或柱材料的老化等原因引起。污染会导致色谱峰形变差、分离度降低、灵敏度下降等现象,严重影响分析结果的准确性。处理色谱柱污染的方法包括使用合适的溶剂清洗、再生柱材料或更换新的色谱柱等。
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色谱柱污染 现象问答
- 2023-02-21 16:13:51为什么我们要关心色谱柱内径?
- 相信很多色谱分析员都知道,改变色谱柱内径将对许多变量产生直接影响,包括峰高、信噪比、平均柱效、样品载量、对强注射溶剂的敏感性、压力、分析物保留次、溶剂用量和/或液体废物的产生等多方面问题。市面上的液相色谱柱的内径有4.6 毫米、3.0 毫米、2.1 毫米等等多种选择,那么,为什么会有这么多内径规格呢,下面恒谱生带您了解。一:内径对柱色谱有什么影响? 在柱色谱法中,样品物质在流动相的帮助下穿过柱子。它们根据与固定相的相互作用进行分离,从而产生不同的保留时间。换句话说,可以根据流动相和固定相之间相互作用的类型以及它们通过色谱柱所需的时间来分离和检测分子。那么,柱径如何符合方程式的呢?可以想象,更大的直径使流动相更容易通过。相反,较窄的列意味着这样做需要更长的时间。可以理解为这对敏感性有连锁反应,花在色谱柱上的时间越少意味着灵敏度越低,而时间越长则灵敏度越高。因此,较宽的直径通常会导致较低的灵敏度,而较窄的直径则与较高的灵敏度相关。其实样本量也会有影响,较宽的色谱柱需要更大的样品和更多的溶剂才能进行分析,而窄的色谱柱可以使用较小的样品和较少的溶剂作为流动相。 当然,选择色谱柱并不是只有内径这一种因素,色谱柱的长度和它们能够承受的压力也可能不同。从长度开始,这可以产生与直径类似的效果。较短的色谱柱可缩短分析时间从而降低灵敏度。而较长的色谱柱会增加分析时间并改善结果。基于以上所述,很显然长而窄的色谱柱会提供更加优越的结果,因为它会增加分析时间、提高灵敏度并且不需要更大的样品。但是,推动流动相通过色谱柱需要更大的压力。色谱柱只能承受一定程度的压力,而泵需要能够提供足够的压力,因此在选择时也需要考虑这一点。在泵的出口和进样阀之间可以安装在线过滤器,是能够用来过滤流动相中的杂质和固体颗粒,保护液相系统的正常运行的一种过滤型色谱耗材。在液相色谱系统中,恒谱生在线过滤器可以很大程度上地减少泵、混合器和管路在流动相中输送过程中所产生的堵塞、损坏仪器等情况出现。二:为什么要使用不同直径的色谱柱? 有两个主要优势:其一是减少流动相消耗,其二是减少峰体积。如果将流速调整为恒定线速度,如HPLC柱径改变时保留时间应相同,因此样品运行时间将保持不变。如果运行时间相同且流速降低,则将使用较少的流动相。峰体积(以体积表示的峰宽)随着色谱柱横截面积的减小或直径变化的平方而下降。这转化为成比例的更高的峰,假设相同质量的样品可以加载到色谱柱上,这可能是正确的,也可能不是正确的。因此,假设注入相同质量的样品,从 4.6 毫米内径的色谱柱换成 2.1 毫米的色谱柱应该会将峰宽减少五倍,并将峰高增加相同的量。 当柱直径发生变化时,对流速进行必要的改变以保持恒定的线速度是相当简单的。减小柱径有助于节省溶剂和提高检测限。但是对于较小直径的色谱柱,可能会观察到系统性能的下降。从故障排除的角度来看,很容易将系统性能不佳归咎于色谱柱本身,而真正的罪魁祸首可能是 LC 系统的柱外体积。对柱外效应的相对不敏感是填充直径 5 µm 颗粒的4.6 mm × 150mm 色谱分析柱可能在未来许多年内仍然是常规 LC 工作的主力色谱柱的原因之一。 今天恒谱生分享的知识先到这啦,希望对您的工作有所帮助!
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- 2023-01-03 16:11:31无处不在的PCR污染,如何有效避免?
- 前言在PCR检测过程中,不可否认的是,没有任何检测是100%准确的,比如我们可能也曾听过假阳性这个名词,那为什么会出现假阳性呢?这其实跟实验操作过程造成的污染相关,在实验开展过程中,主要有4种污染途径:标本间交叉污染、PCR试剂污染、PCR扩增产物污染、实验室克隆质粒污染。如何对污染进行监测?1. 阳性对照在建立PCR实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照,它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否符合理论要求的一个重要的参考标志,阳性对照要选择扩增度中等、复性好,经各种鉴定是该产物的标本,如以重组质粒为阳性对照,其含量宜低不宜高(100个拷贝以下),但阳性对照尤其是重组质粒及高浓度阳性标本,其对检测或扩增样品污染的可能性很大,因而当某一PCR试剂经自己使用稳定,检验人员心中有数时,在以后的实验中可免设阳性对照。2. 阴性对照每次PCR试验务必做阴性对照,它包括:①标本对照,被检标本是血清就用鉴定后的正常血清做对照,被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞做对照;②试剂对照,在PCR试剂中不加模板DNA或RNA,进行PCR扩增,以检测试剂是否污染。3. 重复性实验4. 选择不同区域的引物进行PCR扩增如何避免PCR污染?实验室防污染是重中之重,毕竟影响最终检测结果,那么我们有哪些防污染的方法呢?除了注意避免人工操作引入的污染,我们在实验时应设立适当的阳性对照和阴性对照,阳性对照以能出现扩增带的标准病原体核酸为宜,并注意交叉污染的可能性,每次反应都应由一管不加模板的试剂对照及相应不含有被扩增核酸的样品作阴性对照。同时减少PCR循环次数,PCR产物达到检测水平就适可而止。
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- 2023-01-10 13:36:08青出于蓝,更胜一筹 | InfinityLab Poroshell 120 Aq-C18 极性保留色谱柱
- 你是否正面临着大量化合物分析的挑战?你是否想开发同时保留极性和非极性化合物的分离方法?你是否在寻找一款色谱柱,在分析物保留和通量之间平衡?全新 Agilent InfinityLab Poroshell 120 Aq-C18 色谱柱横空出世,反相模式下使用 100% 水性流动相大幅提高强极性化合物的保留性能,兼顾通量和保留。Agilent InfinityLab Poroshell 120 系列色谱柱,多年来一直是追求效率的分析工作者的利器。除了推出了粒径为 1.9 μm 和 4 μm 的填料,安捷伦还不断增加了 Poroshell 120 固定相类型,进一步拓展了应用范围。目前 Poroshell 120 系列用于小分子化合物分离的色谱固定相有 3 种粒径、20 种固定相(包括本次新品 Poroshell 120 Aq-C18)。InfinityLab Poroshell 120 Aq-C18 色谱柱能够:提高极性化合物的保留兼容 100% 水性流动相无需担心固定相塌陷或去湿问题批次间高重现性可在所有分析型 HPLC 和 UHPLC 系统间扩展如果您使用普通 C18 色谱柱,在分析方法开发/确认阶段遇到如下问题:化合物保留、分离和峰型有待改善待测组分极性跨度大高水或者纯水条件下化合物保留时间漂移安捷伦 InfinityLab Poroshell 120 Aq-C18 将是您的理想之选!
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- 2022-03-08 11:51:31全新MaxPeak Premier SEC色谱柱隆重上市
- 全新MaxPeak Premier SEC色谱柱隆重上市,助力新型抗体药物分析近日,沃特世公司隆重推出MaxPeak Premier SEC系列色谱柱。这款色谱柱专为ADC/双抗分析设计,只需简单的流动相,就能同时分离聚合物和片段。图1. MaxPeak Premier SEC系列色谱柱MaxPeak Premier SEC采用专 利的Premier柱管,这是沃特世首次将该技术应用于大分子分析的产品线。结合新型PEO键合相填料表面修饰,可大大减少次级作用,仅需较少的盐即可得到对称峰形。这一特点将使SEC的方法开发更简单,即单一 流动相即可满足不同样品的分析需求,有利于建立一个高效的SEC分析平台。图2. 不同流动相中蛋白混合标准品分离色谱图(A: MaxPeak Premier SEC色谱图;B: 传统SEC色谱图)。针对ADC/双抗的分子特性,MaxPeak Premier SEC对填料的孔径进行了优化,孔径分布更加合理,使ADC/双抗的聚合物及片段分析都有了明显的改善。图3. MaxPeak Premier SEC分析ADC/双抗的对比色谱图。
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- 2021-07-26 08:50:46如何恢复hplc色谱柱性能?
- 大家都知道HPLC色谱柱的寿命是有限的,在使用过程中随着时间的推移,其性能开始下降。你可以通过峰形和峰形之间的分离,柱背压的不规律增加以及重影峰的出现来判断HPLC色谱柱的性能出现了下降。色谱柱是昂贵的色谱耗材,平常使用完毕后需要保养。如果色谱柱真的发生了性能下降,有什么方法可以恢复呢? 首先,如果色谱柱由于过载或使用不兼容的流动相而结垢,是可以恢复的,但已经损坏的色谱柱或已经过使用寿命的色谱柱无法恢复,需要更换。 色谱柱还原程序如下,供大家参考: 反相柱 反相分离是大多数HPLC分离中使用的主要操作模式。填料主要由C18,C4,CN,NH2和苯基固定相组成。建议以水-乙腈-异丙醇-庚烷-异丙醇-乙腈-流动相的顺序用10至20倍体积的溶剂洗脱 正相柱(氨基,二醇,硝基,氨基固定相) 用20倍体积的溶剂冲洗,按照庚烷-异丙醇-乙腈- 水-异丙醇-庚烷的顺序。 GPC / GFC色谱柱 用5倍体 积且PH值为3的0.1%磷酸盐缓冲液冲洗。如果使用了保留力强的蛋白质,则使用从水到乙腈再到水的60分钟梯度液冲洗。 色谱柱在使用前都要对其性能进行考察,使用期间或放置一段时间后也要重新检查,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。柱性能指标包括在一定实验条件下(样品、流动相、流速、温度)下的柱压、理论塔板高度和塔板数、对称因子、容量因子和选择性因子的重复性,或分离度。进行柱效比较时,还要注意柱外效应是否有变化。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外,在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是zui佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性。 恒谱生色谱柱柱管由不锈钢制成,不锈钢柱内壁多经过抛光,减小管壁效应,提高柱效,柱中填充键合硅胶或聚合物填料。色谱柱基于高纯硅胶,采用独特键合技术,具有优异的峰形,灵敏性好。基质金属含量低,对所有类型的分析物均表现完好峰形。机械强度高,稳定性好,质控严格,确保色谱柱性能和色谱柱的使用寿命。有多种尺寸规格可供选择以适应色谱工作者及其使用的不同需求。我们有专业的技术工程师团队为您的需求提供解决方案,欢迎前来咨询了解!
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