- 2025-01-10 10:49:34氨基酸衍生
- 氨基酸衍生是一种重要的化学反应过程，它通过将氨基酸分子中的官能团进行化学修饰，从而生成具有特定性质和功能的新化合物。这些新化合物在生物学、医学、药学等领域具有广泛的应用价值，如作为药物分子、生物标记物、营养补充剂等。氨基酸衍生的方法多样，包括酯化、酰化、烷基化等，具体选择取决于目标化合物的性质和需求。
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氨基酸衍生问答
- 2022-06-15 14:36:04氨基酸衍生法数据大PK：OPA or 茚三酮，原来选它
- 氨基酸是构建生物机体的众多生物活性大分子之一，是构建细胞、修复组织的基础材料。它被人体用于制造抗体蛋白、血红蛋白、酶和激素以维持和调节新陈代谢，是一切生命之源。由于氨基酸的重要性，合适可靠的检测方案将成为评估食品、饲料、药物及生理样品中氨基酸指标的重要选择。HPLC—柱后衍生法，50多年来作为氨基酸领域的重要检测手段，因为其高效的测试准确性和重现性，深受广大用户的信赖。氨基酸检测在药物、食品、饲料中的主要应用有：● 通过分析氨基酸组鉴定多肤和蛋白质；● 原料药和中间体中的杂质和有关物质的测定；● 药物中单个或总氨基酸的定量， 包括复杂基质中标记物的测定；● 重组蛋白生产过程的控制；● 确定氨基酸组成也是保证食品和饲料营养价值的必要条件；● 用于产品质量及过程监测。 衍生方法介绍Pickering Laboratories根据上述应用的检测对象的不同，将衍生方法分为OPA衍生法和茚三酮衍生法，两种方法都可以与任何氨基酸阳离子交换柱和洗脱液组合使用。其中我们称为Trione ®的专利茚三酮试剂，也广泛应用于氨基酸分析仪中。 OPA法与茚三酮法区别见下表： 氨基酸衍生法 Trione®试剂（专利）分析法OPA试剂分析法衍生试剂TlOO－预混试剂 ；自生产日期起计算， 4个月保质期（950 ml/瓶） TlOOC －预混试剂；自生产日期起计算， 4个月保质期（950 mL/瓶） T200 - 2部分试剂，混合后使用，从生产之日起12个月保质期；4组／箱(900mL／瓶）OD104－氨基酸分析用OPA稀释液； O120-OPA试剂（5g／瓶） 3700-2000 －疏基化合物。（10g／瓶） 这三种产品都是用于氨基酸OPA分析法适用样品一级和二级氨基酸一级氨基酸 在与OPA反应之前需要检测二级氨基酸氧化步骤。使用氧化步骤时，一级氨基酸的检测灵敏度会有所降低。检测器UV/VISFLD仪器灵敏度10 pmole （在色谱柱上）2 pmole （在色谱柱上）色谱柱&洗脱液适用于任何阳离子交换柱氨基酸分析法与任何用于氨基酸分析的阳离子交换柱配合使用配置单泵Ony×PCXI vector PCX+ 0.5 m L反应器单泵Ony×PCX/ vector PCX+ 0.15 ml反应器。 ＊需要带有0.5 mL和0.1 mL反应器的双泵OnyxPCX来检测二级氨基酸。 在此模式下， 初级氨基酸的灵敏度会降低。 色谱柱的选择 图1：钠柱氨基酸分析选择 图2：锂柱氨基酸分析选择 图3：氨基酸标品 图4：豆粕样品 图5：水解单克隆样品 Pickering产品 完整解决方案欧洲药典8.0对于氨基酸的柱后衍生茚三酮法做了详细的要求，药典对于包括化学、 动物、 人或草药来源的活性物质、赋形剂和制剂，顺势疗法制剂，抗生素，制剂和容器等都有所要求。Pickering Laboratories 将欧洲药典作为测试依据，为客户提供完整的氨基酸分析解决方案。 Pickering 柱后衍生仪 解决方案包括Onyx PCX/Vector PCX 柱后衍生仪器、分析柱、保护柱、缓冲液和Trione ®茚三酮试剂。并且对方法进行了优化， 在符合药典各项体系适宜性要求的同时，提高了分析的灵敏度及分析效率。 Pickering全套试剂包 图6：依据欧洲药典8.0法测试氨基酸 关于Pickering Laboratories 美国Pickering Laboratories公司是仅有的专业提供人工测试体液和柱后衍生化学试剂、色谱柱、分析方法等柱后衍生分析整体解决方案的机构，其不断创新及良好的信誉被众多的美国政府机构如EPA、ATF、FDA、AOAC和世界著名的厂商所认可。
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- 2024-11-13 15:14:01柱后衍生系统的原理是什么？柱后衍生的作用有哪些？
- 柱后衍生系统（Post-Column Derivative System）是一种广泛应用于液相色谱分析中的技术，旨在提高分离效果与检测灵敏度。该技术通过在色谱柱分离后，增加一个衍生反应步骤，允许分析物与试剂反应生成新的衍生物，从而增强其在检测仪器中的可检测性。本文将深入探讨柱后衍生系统的基本原理、应用场景及其对分析精度的提升作用。核心原理及工作机制柱后衍生系统的核心原理是通过化学反应对分析物进行衍生化，衍生后的化合物通常具有更强的吸光度、荧光性或更高的质谱响应，使得原本难以检测或响应较弱的化合物变得更容易检测。具体来说，色谱分析物在分离出色谱柱后，与特定的衍生试剂发生反应，这一反应通常发生在柱后设备中。此过程常常依赖于特定的反应条件，如温度、pH值和反应时间等，确保反应的选择性和高效性。柱后衍生系统的组成与工作流程柱后衍生系统的主要组成部分包括色谱柱、柱后衍生装置和检测器。在整个系统中，液相色谱柱负责分离混合物中的各组分，柱后衍生装置负责对分离出的各组分进行衍生化反应，而检测器则负责检测反应后的产物。具体工作流程如下：样品进样与分离：样品通过液相色谱系统进入色谱柱，并在柱内根据分子间的相互作用力进行分离。柱后衍生化反应：分离后的各组分流经柱后衍生装置，与预设的衍生试剂发生反应。此过程通常在特定的温控系统下进行，以保证衍生化反应的完整性和效率。产物检测与分析：衍生化产物进入检测器（如荧光检测器或质谱仪），通过对比分析信号强度与标准曲线，进行定性与定量分析。柱后衍生系统的应用柱后衍生技术具有广泛的应用价值，尤其在复杂样品的分析中，能够显著提高检测灵敏度。常见的应用领域包括：环境监测：如水质、空气中的有害物质检测，柱后衍生技术能提高某些污染物的检测限，使其更适用于低浓度分析。食品与药品检测：例如，食物中的添加剂、农药残留以及药品中的微量成分分析，柱后衍生化有助于识别和量化这些物质。临床分析：在生物样品（如血液、尿液）中，柱后衍生化技术能增强某些生物标志物的响应，有助于疾病诊断和监测。优势与挑战柱后衍生系统大的优势在于其能够有效提高难以直接检测物质的灵敏度和选择性。这一技术也并非没有挑战。衍生反应的选择性和反应条件必须得到精确控制，稍有不慎可能会影响分析结果的准确性。某些试剂可能存在毒性或不稳定性，使用时需要谨慎处理。
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- 2023-06-28 09:33:13小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA试剂盒操作概要
- 小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA试剂盒操作概要 仅供体外研究使用，不用于临床诊断! 本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定小鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体中小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)含量。 检测范围 0.781-50ng/mL 检测限 0.35ng/mL 实验原理 将小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)与连接于固相载体上的抗体结合，然后加入生物素化的小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)抗体，将未结合的生物素化抗体洗净后，加入HRP标记的亲和素，再次洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值)，计算样品浓度。 试剂盒内容 试剂名称数量试剂名称数量 96孔板(预包被)196孔板覆膜2 标准品0.5ml×1标准品稀释液1.5ml×1瓶 显色剂A液6ml×1瓶样品稀释液6ml×1瓶 显色剂B液6ml×1瓶终止液6ml×1瓶 酶标试剂6ml×1瓶密封袋1 浓洗涤液(30×)1×20mL使用说明书1 小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA试剂盒需自备的设备及试剂 1. 450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热) 2. 单道或多道微量加液器及吸头 3. 稀释样品的EP管 4. 蒸馏水或去离子水 5. 吸水纸 6. 盛放洗液的容器 试剂盒的储存及有效期 1. 未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将TMB 洗涤液，终止液保存于4℃，其他试剂保存于-20℃。 2. 使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。 注意： 试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用;使用后的剩余试剂盒建议在实验后 1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。 小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA试剂盒标本的采集与保存 1. 血清： 将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4oC 过夜，然后 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反复冻融。 2. 血浆： 用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的 30 分钟内于 2-8oC 1000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20oC或-80oC 保存，但应避免反复冻融。 3. 组织匀浆： 1) 取适量组织块，于预冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液，称重后备用(组织块较大需先剪碎后再匀浆); 2) 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果：首先将组织块移入玻璃匀浆器，加入5-10mL 预冷PBS 进行充分研磨，该过程需在冰上进行(有条件实验室可选用机器匀浆);得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融 进一步处理(超声破碎过程中注意冰浴降温;反复冻融法可重复2次)。 3) 将制备好的匀浆液于5000×g 离心5 分钟，留取上清即可检测。 4. 细胞裂解液： 1)贴壁细胞需要先用胰酶消化，离心收集细胞(悬浮细胞可直接离心收集); 2)将收集到的细胞用冷PBS 洗3 次; 3)物理方法裂解细胞(可先超声破碎细胞，再反复冻融)： i 超声破碎：取适量PBS 重悬细胞，用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂。 ii 反复冻融：将待破碎的细胞在-20 oC 以下冰冻，室温融解，反复3 次，使细胞溶胀破碎。 4)将标本于2-8 oC 1500×g 离心10 分钟，收集上清备用。 5. 细胞培养上清或其它生物标本： 请 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反复冻融。 注意： 1. 以上标本均需密封保存，4oC保存应小于1周，-20oC不应超过1个月，-80oC不应超过2个月。 2. 标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。 3. 实验前红细胞裂解液必须用标准品稀释液稀释。 小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA试剂盒试剂准备 1. 使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25oC)，试剂不能直接在37oC溶解。 2. 标准品(冻干品)：每瓶标准品加入标准品稀释液1mL，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为50ng/mL。准备7个稀释标准品的EP管，每个EP管中加入150μL的标准品稀释液，如图所示依次倍比稀释成不同的梯度， 标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 3. 浓洗涤液：用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL，进行30倍稀释。 标本处理 1. 本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。 2. 实验前应预测标本含量，如果标本浓度过高，应对标本进行稀释，使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。 3. 若所检样本不包含在说明书所列样本之中，建议进行预实验验证其有效性，并注意留存样本。 4. 使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致 ELISA实验结果偏差。 5. 若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素 较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。 6. 某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。 7. 建议使用新鲜样本，保存时间过长可能会存在蛋白降解或变性导致实验结果偏差。 小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA试剂盒操作步骤 1. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 2. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 3. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用 4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 5. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 6. 温育：操作同3。 7. 洗涤：操作同5。 8. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 9. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。 10. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 注意： 1. 试剂准备：准备一次实验所需要的酶标条，其它的可从微孔板上拆下，密封，按照说明书要求保存，以备下次使用。 2. 加样：实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。加样时注意不要有气泡，将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。加样或加试剂时，个孔与一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。因此，一次加样时间(包括标准品及所有样品)控制在10分钟内。推荐设置复孔进行实验。 3. 温育：为防止样品蒸发，实验时请将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内，以避免液体蒸发，洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态，同时应严格遵守给定的温育时间和温度。 4. 洗涤：充分的洗涤非常重要，在每次洗涤过程中，都要将洗涤液甩干。洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响的酶标仪读数。如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实 验过程中。 5. 反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟观察一次)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。 6. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 7. 如果实验室内湿度低于60%，推荐使用加湿器提高湿度水平。 实验流程 1. 实验前标准品、试剂及样本的准备; 2. 加样(标准品及样本)50μL，37℃孵育30分钟; 3. 洗板5次，加酶标试剂50ul，37℃孵育半小时; 4. 洗板5次;加入显色液A，B各50ul,37℃孵育显色15分钟 5. 加终止液50μL，立即450nm读数。 6. 计算 小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA试剂盒计算 各标准品及样本O.D.值扣除空白孔O.D.值后作图(七点图)，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为纵坐标(或对数坐标)，O.D.值为横坐标(或对数坐标)，绘出标准曲线(方程式应依回归方程计算的R2值来定，以R2值越趋近于1为好)。推荐使用专业制作曲线软件进行分析，如curve expert 1.30，根据样品O.D.值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与O.D.值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的O.D.值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 特异性 本试剂盒用于检测小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)，经检测与其它相似物质无明显交叉反应。 由于受到技术及样本来源的限制，不可能完成对所有相关或相似物质交叉反应检测，因此本试剂盒有可能与未经检测的其它物质有交叉反应。 精密度 精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV(%) = SD/mean×100 批内差：取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测,每份样本连续测定20 次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。 批间差：选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。 批内差： CV
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- 2020-12-15 14:34:11液相色谱测定氨基酸含量需要哪种衍生剂好?
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