- 2025-04-25 14:16:26肿瘤切除手术
- 肿瘤切除手术是一种外科治疗方法，旨在通过切除患者体内的肿瘤组织来达到治疗目的。手术前需进行详细的检查和评估，确定肿瘤的位置、大小和性质。手术过程中，医生会小心分离并切除肿瘤，同时尽量保留周围正常组织。术后需进行恢复和监测，以防感染和并发症。该手术适用于多种类型的肿瘤，是肿瘤治疗的重要手段之一，但具体方案需根据患者病情和医生建议制定。
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肿瘤切除手术问答
- 2023-02-15 14:27:47肿瘤疫苗生物学活性评估
- 肿瘤疫苗背景肿瘤疫苗，是一种具有预防和治 疗潜力的有吸引力的替代免疫治 疗选择，是近年研究的热点之一。针对肿瘤相关抗原（Tumor-associated antigen,TAA）或肿瘤特异性抗原 (Tumor specific antigen,TSA) 的疫苗可以特异性地攻击和破坏抗原过表达的恶性细胞，并由于免疫记忆而实现慢性治 疗反应。因此，与其他免疫疗法相比，癌症疫苗提供了特异性、安全性和可耐受的治 疗。根据肿瘤抗原的组分，癌症疫苗大致可以分为四种类型：基于 DNA 的疫苗，基于 RNA 的疫苗，基于多肽的疫苗和基于免疫细胞的疫苗。FDA 批准的首 个个性化肿瘤疫苗 PROVENGE (Sipuleucel-T) 是一种基于免疫细胞的疫苗，用于激素难治性前列腺癌的治 疗。除此之外，Moderna，BioNTech 都在布局基于 mRNA 的肿瘤疫苗。图 1 肿瘤疫苗抗原呈递平台示意图肿瘤疫苗有效性评估方法生物体接种疫苗后，肿瘤抗原被带到淋巴结，进而激活抗原特异性的 B 细胞和 T 细胞，活化的 B 细胞产生的抗体及活化的效应 T 细胞会使肿瘤内胀并诱导肿瘤细胞死亡。图 2 肿瘤疫苗诱导的免疫反应示意图如何有效的评估肿瘤疫苗的有效性是一个非常值得探讨的问题，常用的肿瘤疫苗有效性验证的方法，包括细胞因子检测、CTL 活性检测、T 细胞活化标志物检测、抗体滴度检测、ADCC 检测等。1、细胞因子检测细胞因子是由免疫细胞经过刺激而合成并分泌的小分子蛋白质，在免疫应答中起着非常重要的作用，因此可以通过细胞因子的分泌能力来反应疫苗诱导的细胞免疫的水平。常见的细胞因子有白介素 (IL) 、干扰素 (IFN)、 肿瘤坏死因子 (TNF) 等。下面比较了几种常见的检测方法。ELISA 是一种非常经典的细胞因子的检测方法，例如在王晓东等人发表的关于胃癌疫苗研究的文章中，提到了用 ELISA 的方法检测接种疫苗后小鼠骨 髓源树突状细胞（BMDCs）分泌细胞因子的能力，检测方法如下：BMDCs 在含有 10ng/mL GM-CSF 和 10ng/mL IL-4 的 X-vivo 15 培养基中培养，37℃下培养 6 天，然后以每孔 5×104 细胞的密度在 96 孔板中接种。以 5µM 或 10µM 的最 终浓度加入疫苗抗原，孵育 24 小时。使用小鼠 TNF-α 和 IL-12 p70 ELISA Ready-SET-Go 试剂组定量培养上清中的 TNF-α 和 IL-12 。首先在 4℃下用捕获抗体包被 ELISA 板过夜，然后在室温下依次加入阻断液、细胞培养上清和检测抗体，孵育 1h 。 最 后加入终止液和显色剂，用酶标仪 (BioTek) 在 450nm 处记录 OD 值。检测结果如下：从检测结果可以看出，T7（TLR7 激动剂）的存在可以显著提升 ML/MB 抗原诱导的免疫反应。图 3 ELISA 法测定小鼠骨 髓树突状细胞 (BMDCs) 分泌TNF-α (a) 和 IL-12 (b) 的水平Ankita Leekha 等人发表的关于 SRAS-COV2 疫苗文章中，提到了用 ELISPOT 的方法评估细胞因子的分泌水平，可以作为参考。具体方法如下：从小鼠中分离脾细胞和肺细胞，使用小鼠 IFNγ ELISpot 基础试剂盒和小鼠 IL4 ELISpot 基础试剂盒 (Mabtech, VA, USA) 进行 IFNγ 和 IL4 ELISpot 检测。在 37℃ 下，在预包被抗体的 ELISpot 板中，用抗原刺激脾细胞和肺细胞，培养 16-18 小时。第二天，洗掉细胞，加入生物素化的检测抗体。洗板后，加入 1:30000 稀释的 Extravidi-ALP 偶联物，室温孵育 1 小时。洗板后，每孔添加 70µL 显色液，孵育 20-30min，形成斑点，然后用水清洗，干燥。使用 Cytation 7 (BioTek) 对斑点进行量化。每个点对应一个单独的细胞因子分泌细胞。检测结果如下：图 4 ELIPSOT 方法检测小鼠脾细胞和肺细胞分泌细胞因子的水平2、CTL 活性检测疫苗诱导的细胞毒性 T 淋巴细胞 (CTL) 可以直接杀伤肿瘤细胞，起到抗肿瘤的作用，因此可以通过检测 CTL 的杀伤效应来反应疫苗的效果。常用的检测细杀伤效应的方法有很多，下表列举了一些常用的方法。王晓东等人发表的文章中提到了 LDH 检测，检测方法如下：从接种疫苗小鼠的脾 脏中分离淋巴细胞（效应细胞）。EAC 肿瘤细胞（靶细胞）与淋巴细胞（效应细胞-靶细胞比例为 50:1）共培养 4h，使用乳酸脱氢 (LDH) 法测定细胞毒性。将培养 4h 后的培养上清加入在 ELISA 板中，室温下加入底物溶液，孵育 30min。最 后，加入终止液终止反应，并用酶标仪 (BioTek) 在 490nm 处检测光密度。检测结果如下：相对于 PBS 对照组来说，T7-MB 组 CTL 细胞具有显著的杀伤效应。图 5 LDH 法测定 CTL 介导的 EAC 靶细胞的裂解水平3、抗体滴度及亲和力检测肿瘤疫苗除了可以诱导细胞免疫之外，也可诱导体液免疫，对此可通过对抗体滴度及亲和力进行检测来反应疫苗抗肿瘤的效果，ELISA 是一种非常经典的检测方法。上述关于胃癌疫苗的文章中通过 ELISA 方法测定小鼠接种疫苗后血清中总 IgG 含量，具体检测过程如下：小鼠接种疫苗后收集血液样本，通过 3000g 离心 15 分钟获得血清样本。ELISA 板预先在 4℃ 包被 BSA-MG1 过夜，然后在室温下依次加载封闭溶液 2h，血清样品 (1:50 稀释) 和检测抗体 1h。最 后，在体系中加入 p-NPP 底物 (Millipore) 和终止液，用酶标仪 (BioTek) 在 405nm 处记录 OD 值。检测结果如下：相对于 PBS 对照组来说，T7-MB 组抗体含量明显上升。图6 ELISA法测定疫苗诱导的血清抗体水平除此之外，在 Emily C. Gale 等人发表的关于 mRNA 递送系统及辅剂研究的文章中，通过 ELISA 的方法测定了 mRNA OVA 模式疫苗诱导的 OVA 特异性抗体的绝 对含量及其亲和力。具体检测方法如下：抗体浓度：小鼠接种加强疫苗后，采集血液样品，血清按照 1:100 000 进行稀释。采用 anti-OVA mouse IgG1 ELISA (Cayman Chemicals) 试剂，按照试剂厂家的说明进行 ELISA 实验。使用 Synergy H1 Microplate Reader (BioTek) 在 450nm 处记录 OD 值。根据标准曲线计算血清抗体浓度，表示 mg/mL。抗体亲和性：将 12 个梯度稀释的血清与恒定浓度标记 HRP 的 anti-OVA 抗体 (3nM) 混合，并在 OVA 抗原包被的板中室温孵育 2 小时，洗板后用 TMB 底物孵育，用 HCl 停止反应。测定 450nm 处的 OD 值。根据业内发现的单克隆抗体的共同亲和力，假设对照抗体的 KD 为 1nM 对实验组的 KD 值进行统计。这一假设仅影响报告的绝 对 KD 值，而不影响实验组之间的相对差异。检测结果如下：pIC 为双链 RNA 结构模拟物，图E中比较了可溶性的 pIC 和不同纳米颗粒递送系统诱导的绝 对抗体含量，从图 E 中可以看出 2B 递送系统诱导的 OVA 特异性抗体含量最 高。从F和G可以看出 2B 递送系统相对于可溶性 pIC 来说诱导的 IgG 亲和力也显著升高。图 7 pIC/PBAE NPs 增强体液免疫4、ADCC 检测疫苗诱导体液免疫产生的抗体能够捕捉目标抗原，阻断这个靶分子的功能，也可以引导其他免疫细胞（如巨噬细胞和自然杀伤细胞）杀死表达抗原的靶细胞，在肿瘤治 疗中，特别是血液肿瘤中，抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用 (ADCC) 起着关键作用，ADCC 常用的检测方法包括细胞活力检测、LDH 检测、工程细胞株、Delfia、RTCA、细胞成像检测等。王晓东等人发表的关于胃癌疫苗研究的文章中，提到了 LDH 方法检测 ADCC，检测方法如下：小鼠接种疫苗后，采集其血清样本（1:25 稀释），然后与 EAC 细胞（靶细胞）在 37°C 孵育 30min。使用小鼠 NK 细胞分离试剂盒从正常 BALB/c 小鼠中分离出自然杀伤 (NK) 细胞（效应细胞），与抗体标记的 EAC 细胞以效靶比 50:1 共培养 4 小时。采用 LDH 法 (Promega) 测定细胞毒性，检测方法与之前提到的 CTL 活性检测的方法一致。检测结果如下：相对于 PBS 对照组来说，T7-MB 组产生的抗体具有显著的杀伤效应。图 8 LDH 法测定血清抗体介导的 EAC 靶细胞的裂解水平肿瘤疫苗生物学活性检测解决方案推荐本文介绍了肿瘤疫苗活性检测的常用方法，包括细胞因子检测、CTL 活性检测、抗体滴度及亲和力检测、ADCC 检测等方法，涉及到了酶标仪、成像系统、流式、RTCA、洗板分液系统等设备。Agilent 细胞分析事业部可以从多个角度为用户提供从样品处理，到结果检测再到数据分析的全面解决方案。
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- 2023-06-25 11:45:31【Leica in Scope课程】前节手术的技术趋势：术中OCT与3D可视化手术
- 第四期：前节手术的技术趋势：术中OCT与3D可视化手术课程简介：来自英国南安普顿大学医院的David Anderson医师和来自罗马尼亚Oculus 眼科诊所的Ozana Moraru博士将分享新兴技术趋势如何改变眼前节手术。他们将通过临床病例和手术视频讨论术中OCT和3D的价值。讲者：Mr. David Anderson 高级眼科顾问医师南安普顿大学医院 英国Dr. Ozana Moraru眼科医师欧科路斯眼科诊所 罗马尼亚
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- 2024-07-04 14:33:073D打印牙科专用树脂：种植手术导板树脂全面解析
- 种植手术导板树脂是一种用于牙科和医疗领域的光固化3D打印材料，它能够帮助医生在手术中准确定位种植体的位置、深度和角度，从而提高手术的成功率和种植体的长期稳定性。 种植手术导板树脂具有优异的生物相容性和高机械强度，支持高速成型，同时其高透明度、易于抛光、低吸水率的特点都可以满足牙科应用的需求。 01产品特点 1. 生物相容性 导板树脂必须满足生物相容性的标准，以确保不会在人体内部引起不良反应。 2.高机械强度 导板树脂通常具有较高的机械强度，包括弯曲强度和抗冲击强度，这使得它能够承受一定的外力而不发生断裂，是制作种植手术导板等需要高强度应用场景的理想材料。 3.低吸水率 导板树脂材料具有较低的吸水率，在较为湿润的口腔环境中，依然能保持模型的尺寸稳定性。 4.易于抛光 导板树脂表面光滑，易于进行抛光处理，以达到更高的精度和美观度，对于口腔科应用尤为关键。 5.耐高温蒸汽灭菌 材料能够耐受高温蒸汽灭菌处理，保证在临床使用前的无菌要求。 02产品应用 正畸导板、手术导板、功能性保持器、颌垫、咬合板、X光导板、其他正畸附件 03产品参数近年来，基于3D打印技术开发的数字化定制齿科解决方案在在口腔诊疗领域被广泛应用。导板树脂的应用过程简单可分为“数据采集、诊断性分析、种植体三维设计、导板结构设计、导板数据输出、导板打印、导板引导下实施手术”等步骤。使用牙科导板树脂进行3D打印得到的模型，精度更高，尺寸稳定性更好，可以提高在植入手术中种植体的植入位置、方向和角度的精确性，且可以采用高压蒸汽消毒，提高手术的安全性，避免损伤重要结构，可以很大程度上改善患者的就医体验。
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- 2022-12-25 11:02:19脊柱手术中的高级可视化
- 近年来脊柱手术取得了有意义的进展。微创脊柱手术(MISS)技术具有显著的优势，有助于大限度地减少手术创伤，改善患者结果，并缩短术后恢复时间。手术显微镜，为脊柱手术的可视化质量设定了新的标准。手术显微镜提供了优质的光学器件和照明，以及反应灵敏且稳定的落地支架。手术显微镜可以为狭窄的腔体深处提供明亮的全聚焦视场。主要经验医生在进行后路腰椎融合术时手术显微镜的优点：帮助医生使手术创伤更小。手术显微镜的主要特点：简单易用、连通性、全面可视化、景深大、最 佳照明、图像质量高和符合人体工学的操作体位。关于手术显微镜手术显微镜为支持微创脊柱手术(MISS)和诸如后路腰椎融合术、后路腰椎椎体间融合术等手术提供了独特的优势。手术显微镜具有出色的光学性能和大景深，让医生看到所需的细节。无需反复寻找重要细节或不断重新聚焦。手术显微镜的支架采用轻量化设计且功能丰富多样，可快速设置，能提高手术室的工作效率。在脊柱手术中使用手术显微镜给医生留下了什么印象？手术显微镜是一个非常好的设备，易于使用，易于操作。对于手术室中的操作人员来说，该机器的设计使其简单易用。例如，触摸屏非常方便，简单易用，也可以将它轻松连接到手术室的上方屏幕。在使用手术显微镜的过程中，医生体会到了哪些优势？医生使用手术显微镜时可以清楚地看到受损侧的退化神经根，可以拥有很好的视野，在手术侧非常深入地聚焦。可以在解剖层看到清楚的区别。可以看到黄色韧带，神经根，硬膜囊，鞘囊，可以在使用焦距和放大倍数的同时清晰地区分它们。手术显微镜的哪一点最吸引医生？对医生来说手术显微镜主要的好处是，医生可以将光线很好地、深入的带入手术视野中，可以在不改变生理位置的情况下改变显微镜的位置，这样可以更加轻松地对患者进行手术。使得手术创伤更小，所以对患者更有益处。手术显微镜的其它优势手术显微镜进入手术室也非常人性化，侧屏幕，新的平板屏幕，具有非常高的图像质量，让手术室里的每个人都可以观看手术。
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- 2022-12-06 13:04:21探秘肿瘤微环境，原位“看透”细胞因子
- 细胞因子是肿瘤微环境（Tumor Microenvironment,TME）中细胞通讯的关键介质，在癌症的发生、发展、治 疗和预后等多个方面发挥重要作用。在过去的 40 年中，细胞因子和细胞因子受体作为癌症靶点或癌症治 疗方法得到了广泛的研究。目前公认的临床前治 疗策略为增强干扰素和白细胞介素（包括 IL-2 ，IL-7 ，IL-12 和 IL-15 ）的生长抑 制和免疫刺激作用，或抑 制细胞因子（如 TNF ，IL-1β 和 IL-6 ）的炎症和促进肿瘤的作用[1]。图 1 . 细胞因子在肿瘤微环境中的作用特定细胞因子的表达也与肿瘤细胞的高存活率和高转移性密切相关。其中促炎细胞因子 IL-6 和 IL-8 与多种癌症相关，包括淋巴瘤、黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌和结肠直肠癌等 [2,3]。因此，分析细胞因子的表达是一种重要的诊断工具和预测癌症预后的关键因素。非放射性的 RNA 原位杂交技术（ViewRNA ISH）是一种高灵敏度的检测细胞因子表达的有效方法，并且可以对 1 至 4 个 mRNA 目标进行多重分析。检测原理如下图所示：图 2 . ViewRNA ISH 检测原理安捷伦BioTek Cytation 5 多功能细胞成像微孔板检测系统，可容纳多达四个荧光通道同时成像，快速并出色地成多色荧光成像。仪器配备的高内涵分析软件可自动计算细胞内 RNA 的表达水平。Cytation 5 活细胞成像工作站结合ViewRNA ISH，为细胞因子研究提供了一种高效率、高灵敏度和可重复的检测方法。实验案例分享 实验一．细胞因子mRNA的成像和分析 为研究细胞因子mRNA 在不同营养条件下的表达情况，设置两组对照实验。阳性对照细胞培养于完全培养基中，而阴性对照细胞经过 18 小时的血清饥饿处理。随后加入 ViewRNA 探针以标记 IL-6 、IL-8 和 ACTB mRNA ，在Cytation 5 上分别使用 RFP 、GFP 、Cy5 和 DAPI 通道对探针进行成像完成 ISH 细胞分析。图像结果表明：细胞因子mRNA 的表达在营养匮乏的条件下会显著降低。图 3 . 阳性和阴性对照组成像。HCT116 放大 20 倍图像作为（ A ）阳性对照和（ B ）阴性对照。MDA-MB-231 细胞放大 40 倍的图像作为（ C ）阳性对照和（ D ）阴性对照。蓝色：DAPI 染色的细胞核；绿色：标记 IL-8 mRNA ；橙色：标记 IL-6 mRNA ；红色：标记 ACTB mRNA 。接下来为了定量分析细胞因子表达，首先在 Cytation 5 的 DAPI 通道下进行细胞核计数，以确定每孔的细胞数量（图 4A ）。然后分别在GFP 、RFP 通道进行细胞因子探针（ IL-6 或 IL-8 ）的荧光信号分析（图 4B ）。通过细胞荧光信号的比率评估不同实验条件下的细胞因子表达（图 5 ）。图 4 . 每个细胞的荧光信号分析。( A ) 使用 Agilent-BioTek Gen5 软件进行细胞分析圈选出 DAPI 标记的细胞核；( B ) 荧光标记的 IL-8 信号的图像分析。如图 5 所示，使用 ViewRNA ISH 和 Cytation 5 这一组合准确的量化了细胞内 IL-6 和 IL-8 mRNA 的表达。图 5 . MDA-MB-231 细胞中 IL-8 表达和 HCT116 细胞中 IL-6 表达，并以细胞数目进行校正。 实验二．诱导细胞因子 mRNA 的表达 使用不同剂量的 IL-1β 刺激 DU145 细胞，以分析细胞因子的 mRNA 的表达（图6）。图 7 结果显示：虽然 IL-6 和 IL-8 的 mRNA 表达增加，但 IL-8 的表达变化更为显著，这与先前研究结果一致[4]。IL-1β 的最 高剂量下，这两种细胞因子的表达减少则是由于细胞毒性。这验证了该检测方法的可行性与稳定性。图 6 . 不同浓度的 IL-1β 刺激下的 IL-6 、IL-8 和 ACTB 荧光 mRNA 探针信号 ( A ) 0 ng/mL；( B ) 0.02 ng/mL ；0.128 ng/mL；( D ) 0.8 ng/mL。蓝色：DAPI染色的细胞核；绿色：标记的IL-8 mRNA；橙色：标记的 IL-6 mRNA ；红色：标记的 ACTB mRNA 。图 7 . 不同浓度的 IL-1β 刺激下 DU145 细胞中 IL-6 和 IL-8 mRNA 的表达。 实验三．抑 制细胞因子 mRNA 的表达 研究表明丝裂原活化蛋白激酶（ MAPK ）可调节 IL-8 ，并证明用 MAPK/ERK 抑 制剂 U 0126 治 疗可减少 DU145 和 MDA-MB-231 细胞中的炎症细胞因子[4,5]。为了确认这一现象并验证 ViewRNA ISH 和 Cytation 5 这一组合的能力，将不同浓度的 U 0126 加入到每种细胞类型中孵育 30 分钟。然后用 1 ng/mL 的 IL-1β 刺激 DU145 细胞达 3 小时，而 MDA-MB-231 细胞未被刺激。使用 GFP 和 RFP 通道进行细胞计数和图像分析以评估在 U 0126 治 疗后 IL-8 和 IL-6 细胞因子 mRNA 的表达。采集的图像（图 8 ）和计算的荧光信号强度 （图 9 ）证实了 U 0126 的抑 制作用。此外，也验证了该方法的灵敏度，可以准确识别给予抑 制剂后 mRNA 的表达变化。图 8. U 0126 抑 制 IL-8 mRNA 的表达。图像显示了在不同浓度的 U 0126 处理后 ( A-E ) MDA-MB-231 细胞内 IL-6 、IL-8 和 ACTB 荧光 mRNA 探针信号；( F-J ) 为 DU145 细胞。蓝色：DAPI 染色的细胞核；绿色：标记的 IL-8 mRNA ；橙色：标记的 IL-6 mRNA ；红色：标记的 ACTB mRNA 。图 9 . U 0126 治疗后 IL-8 和 IL-6 mRNA 在 MDA-MB-231 和 DU 145 细胞中的表达结 语ThermoFisher 的 ViewRNA ISH 细胞分析试剂盒和探针提供一种灵敏的方法来检测 mRNA 表达。该方法在安捷伦BioTek Cytation 5 细胞成像系统的加持下得以更更快地采集多荧光通道的图像，并更精 准的计算出每一个细胞的荧光信号强度。这种检测、成像和分析的完 美结合提供了一种灵敏、灵活和高通量的方法用以检测细胞因子 mRNA 的表达。参考文献：[1] Propper DJ, Balkwill FR. Harnessing cytokines and chemokines for cancer therapy. Nat Rev Clin Oncol. 2022 Apr;19(4):237-253.[2] Kampan NC, Xiang SD, McNally OM, Stephens AN, Quinn MA, Plebanski M. Immunotherapeutic Interleukin-6 or Interleukin-6 Receptor Blockade in Cancer: Challenges and Opportunities. Curr Med Chem. 2018;25(36):4785-4806.[3] Vecchi L, Mota STS, Zóia MAP, Martins IC, de Souza JB, Santos TG, Beserra AO, de Andrade VP, Goulart LR, Araújo TG. Interleukin-6 Signaling in Triple Negative Breast Cancer Cells Elicits the Annexin A1/Formyl Peptide Receptor 1 Axis and Affects the Tumor Microenvironment. Cells. 2022 May 20;11(10):1705.[4] Kooijman R, Himpe E, Potikanond S, Coppens A. Regulation of interleukin-8 expression in human prostate cancer cells by insulin-like growth factor-I and inflammatory cytokines. Growth Horm IGF Res. 2007 Oct;17(5):383-91.[5] Chelouche-Lev D, Miller CP, Tellez C, Ruiz M, Bar-Eli M, Price JE. Different signalling pathways regulate VEGF and IL-8 expression in breast cancer: implications for therapy. Eur J Cancer. 2004 Nov;40(16):2509-18.
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