- 2025-01-10 10:50:00酵母抗体库构建
- 酵母抗体库构建是一种利用酵母细胞作为表达系统,构建包含多种抗体基因的文库的技术。该技术通过基因工程手段,将抗体基因导入酵母细胞,使其表达出相应的抗体。这些抗体能够与目标分子特异性结合,用于疾病诊断、治疗及科学研究等领域。酵母抗体库构建具有高效、高通量、成本低等优点,能够快速筛选出具有高亲和力和特异性的抗体,为抗体药物研发和疾病治疗提供有力支持。
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- 从酵母展示到抗体优化:全面了解抗体酵母展示服务技术
- 本文将探讨酵母表面展示技术的原理、酵母抗体库构建和筛选技术的实际应用,并展望其未来的发展方向。
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酵母抗体库构建问答
- 2023-12-25 17:14:18重组抗体的类型有哪些?
- 重组抗体,也被称为重组免疫球蛋白,是通过基因工程技术将抗体的基因在合适的宿主细胞中表达并生产出来的一类抗体。与传统的多克隆抗体和单克隆抗体相比,重组抗体具有更高的特异性和亲和力,并且可以针对特定的抗原表位进行设计和优化。重组抗体的类型包括嵌合抗体、双特异性抗体、抗体片段和Fc融合蛋白等。下面一起来看一下他们各种的应用:https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/recombinant-antibody-overview①嵌合抗体1975年,杂交瘤技术的发现彻底改变了抗体研究和临床开发。然而,鼠源性抗体的疗-效受到人抗鼠抗体(HAMA)效应的限制,鼠源性单抗对人体具有异种蛋白的免疫原性 ,在人体内半衰期较短。1984年,研究人员通过基因工程构建了第一个嵌合抗体,也是公认的第一种重组抗体,以降低鼠源抗体在人体内的免疫原性。其中,约30%-35%的分子来源于小鼠的抗体序列,约65%-70%来源于人的抗体序列。所得嵌合抗体保留了亲代小鼠抗体的抗原结合能力。抗体嵌合是开发治-疗性人源化抗体的第一步。义翘神州采用CDR移植技术和计算机辅助分子建模,提供高质量的单克隆抗体人源化服务,成功率高,人源化程度>90%。②抗体片段每一个完整的免疫球蛋白(IgG)分子包含通过二硫键连接的两条重链和两条轻链。抗体片段(如Fab、scFv和VHH)体积小,比其全长抗体具有更好的组织或肿瘤穿透力。因此,它们在免疫治-疗方面具有巨大的前景,尤其是在实体瘤方面。此外,它们的半衰期也较短,可用作放射性显像剂。然而,由于缺乏Fc区,它们不能引起Fc介导的抗体效应功能,如抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。起初采用酶解法对IgG抗体进行片段化。胃蛋白酶作用于铰链区二硫键所连接的两条重链的近C端,水解产生被称为F(ab’)2的二价Fab片段。然后,通过木瓜蛋白酶将该片段裂解为两个相同的Fab片段。然而,酶解法限制了可制备的抗体片段类型,而且不适合工业化大规模生产和纯化。随着抗体工程技术的进步,这些问题可以通过重组生产抗体片段来解决。抗体基因克隆测序成功后,可通过瞬时转染在原核表达系统(如大肠杆菌)和哺乳动物系统(HEK293细胞)中表达抗体片段。凭借丰富的重组生产经验,义翘神州建立了高通量VHH表达平台,交付了多个VHH抗体生产项目,总体成功率超过90%。除了常见的VHH形式,我们还可以表达双特异和多特异VHH。此外,义翘神州还可以表达其他各种高特异性和亲和力的抗体片段,如scFv和Fab。③双特异性抗体与常规单克隆抗体不同,双特异性抗体(bsAb)具有两个结合位点,可识别同一抗原上两个不同抗原或表位。由于这一特性,双特异性抗体备受研究者和制药业的关注。截止目前,美国食品药品监督管理局(FDA)已批准了4种双抗药物,而且160多种双抗正在进行临床试验,用于治-疗癌症、糖尿病、阿尔茨海默病和其他疾病。起初,双特异性抗体通过四源杂交瘤技术制备,但这对下游抗体生产和纯化构成了巨大的挑战。随着过去20年重组DNA技术的发展,出现了几种双特异性抗体形式,以适应所需的靶标-产品特征。为了解决重链错配问题,Genentech首先提出了“knob-into-hole”(KiH)技术,该技术通过对CH3结构域进行改造,在每条重链中创建一个“knob”或一个“hole”,以诱导异源二聚化。同样地,研究人员也采用了common light chain 和CrossMab等其他技术来解决轻链错配问题。表达双特异性抗体主要在哺乳动物细胞中进行。由于单克隆抗体和双特异性抗体之间的各种结构相似性,许多已建立的常规单抗纯化工艺也可适用于双特异性抗体。(参见另一篇文章:“双特异性抗体:抗体治-疗中的新星”)④Fc融合蛋白Fc融合蛋白(又称Fc嵌合融合蛋白、Fc-Ig和Fc标签蛋白)是一种同源二聚体,由免疫球蛋白的Fc段与具有生物学活性的蛋白分子组成。虽然单克隆抗体是治-疗性生物制剂开发的重-点,但Fc融合蛋白也是一类成功的生物制药产品,至少有13种药物获得了欧洲药品管理局(EMA)和美国FDA的批准。除治-疗应用外,Fc融合蛋白还是基础研究中的检测试剂,包括流式细胞术、免疫组织化学和蛋白结合试验。事实上,与Fc区的连接可以提高一些结合蛋白的溶解度和稳定性。鉴于其大小和对糖基化的需求(大多数是糖蛋白),Fc融合蛋白主要在哺乳动物表达系统中产生。目前,抗体工程技术取得了一定的进步,这极大地促进了各种形式重组抗体的开发,用于疾病治-疗。FDA已批准了100多种抗体药物,目前有多种抗体处于临床后期开发阶段。此外,重组抗体还可用于许多研究应用:蛋白免疫印迹(WB)、免疫组织化学(IHC)、免疫荧光(IF)、流式细胞术(FC)和表面等离子体共振(SPR)。总之,重组抗体是基因工程技术的重要应用之一,其类型多样,具有广泛的应用前景。随着基因工程技术的发展,重组抗体的生产成本和安全性问题也将得到进一步优化,为临床治-疗和科学研究提供更多有效的工具。同时,我们也应该认识到重组抗体的潜在风险和挑战,加强对其安全性和有效性的评估和监管,以确保其能够更好地服务于人类的健康事业。更多重组抗体详情关注:https://cn.sinobiological.com/news/recombinant-antibodies-formats
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- 2023-06-25 12:12:24生物样本库建库难?上云学院“粽”享知识&好礼
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- 2023-06-16 14:28:25构建表达载体想降本增效?看这一篇就够了
- 想要开发有稳定生产能力的细胞株,除了在细胞开发中对于细胞表达能力的评估筛选以外,前期的表达载体的构建过程也非常重要。使用纳升移液技术可以显著提高细胞株过程基因合成,表达载体构建以及转染筛选等实验的实验效率,降低实验成本。声波移液展示Echo®移液系统依靠专 利技术(U.S. Patent 6938995)和创新方法改变移液操作在整个生命科学领域中的应用。它采用动态液体分析(Dynamic Fluid Analysis™, DFA)技术和声波移液(Acoustic Droplet Ejection,ADE)技术,让研究人员能够移取多种不同类型的液体,完成微量小体积(2.5/25nL)的移液工作。全流程无需枪头耗材,无交叉风险。纳升移液技术让细胞株构建更快、更准、更经济更快—— Echo快速任意孔到任意孔移液,极速基因组装在质粒构建前期,需要非常多的准备实验,如基因组装中将不同的DNA片段混合,在检测反应中将不同的样本组合,在NGS文库构建过程中将多个文库pooling到一起,在CRISPr基因编辑中构建sgRNA文库等等,这些实验都需要进行快速、灵活的加样移液,就算使用高通量的移液工作站,往往也要好几小时才能完成。纳升移液技术Echo的任意孔到任意孔的快速移液特点则让此类应用简单、快速化,每次转移花费更少时间更短。这为基因组装节省了高达82%的时间。从母板任意孔转移任意体积样品到目标板任意孔中,实现快速挑选、样品混合和组合。有效缩短实验周期更准—— Echo加样精 准,提高克隆效率利用质粒上含有的抗性选择进行筛选,需要对筛选结果进行鉴定, 而qPCR也是常用的鉴定方法之一。使用Echo纳升移液技术进行微量化克隆筛选鉴定,可以以更少的实际成本精 准完成实验。使用Echo完成 qPCR的反应体系构建,通过减少每个组件的体积,并使用不使用tips的Echo,将反应体积缩小10倍,从10 μL减少到1 μL,成本降低了8倍。精 准减小实验体积更经济—— Echo微量化,缩小反应体系,让新技术更经济系统化的设计必然会带来更大的样本量,从而导致更高的费用, Echo采用声波的能量进行无接触式移液,且每滴液滴仅为2.5nL或25nL,因此可以直接省去吸头耗材的消耗,也可以将检测反应体系降低4-100倍,使成本急剧下降。有效缩减试剂成本Gibson and Golden Gate Assembly实验:不同反应体积的成本效益和组装效率比较产品信息“仅用于科研,不用于临床诊断”
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- 2025-10-15 17:04:30数字化转型下,各类实验室软件如何构建高效合规的智能生态?
- 在数字化转型浪潮下,实验室软件已成为现代实验室提升运营效率、规范作业流程、挖掘数据深层价值的核心支撑,不同类型的软件聚焦特定环节痛点,协同构建起覆盖实验室全场景的数字化生态体系。以下为几种主流实验室软件及其核心功能详解:1. King's LIMS(实验室信息管理系统)严格遵循 ISO 17025 等国际标准与行业规范,构建样品全生命周期的闭环管理体系。核心功能包括检验流程标准化管控、人机料法环全要素资源管理、合规性校验与质量风险防控,以及检测报告的自动生成。且系统配备多级数据审核机制与深度统计分析能力,确保实验室运营合规、高效且数据全程可追溯。2. King's ELN(电子实验记录本)以结构化数字化形式全面替代传统纸质记录,支持实验数据直接录入、公式自动计算、实验步骤与结果电子化追溯,有效避免纸质记录易丢失、难检索、易篡改等问题。该系统可与 King's LIMS 无缝集成,实现实验数据与检验流程数据的互联互通,进一步提升实验室数据流转效率。3. King's SDMS(科学数据管理系统)专注于实验室原始数据的高效管理,能够自动采集、精准存储各类仪器生成的原始数据,支持对结果数据与文件进行分类管理,打破数据孤岛,为后续数据复用、深度分析与合规审计奠定坚实基础。4. King's Bl 高性能敏捷分析系统聚焦实验室数据价值挖掘,可满足用户在报表、数据可视化、自助探索分析、数据挖掘建模、智能分析等方面的多样化需求,帮助用户打破信息孤岛有效整合数据,提供敏捷开发能力同时快速响应业务和管理层的数据需求,帮助实验室实现数字化运营,并全流程支持。5. King's IOT 实验室设备及环境物联监控预警系统依托物联网技术构建实验室安全与环境智能管控体系,可实时采集实验室关键环境参数与设备运行状态数据,通过稳定的无线传输硬件将数据实时上传至监控平台。平台具备数据实时显示、存储与分析功能,当监控参数超出预设安全范围时,可自动触短信通知等预警机制,为科研与检测活动提供稳定、安全的环境保障。 数字化生态系统的成功运行,依赖于各模块之间的深度互联与数据流的闭环整合。实验室藉此构建出“可视、可控、可预测”的数字孪生体,在合规、效率与创新之间达成最优平衡。上述系统各司其职又紧密协同,共同构建起高效、合规、智能的数字化实验室新生态,推动实验室运营迈向智能化与高效化的新阶段。
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- 2024-01-16 16:35:20免疫组化抗体(IHC)的实践应用与常见问题详解
- 免疫组化法(IHC)是使用抗体检测组织切片(例如肝脏、胰-腺或心脏)中细胞蛋白质(抗原)的过程。 当组织样本被送到实验室进行疾病检查时,有几个细节不易确定。几种疾病或疾病亚型在显微镜下可能看起来相似或看起来具有相似大小的细胞,但具有不同的行为和必要的治-疗,区分它们的最佳方法是检测这些细胞上作为标记的特定分子。免疫组化法(IHC)是一种使用抗体(匹配分子)的技术,用于寻找、识别附着在细胞上的标记物。在显微镜下可以看到抗体本身,这有助于技术人员进行精确识别。 免疫组化法(IHC)已广泛应用于医学中,特别是癌症诊断。淋巴瘤是依赖于IHC进行正确诊断和治-疗决策的癌症之一。 免疫组化常见问题:问题一:我应该使用PIER还是HIER进行抗原修复? 固定过程可能会掩盖抗原,导致抗体结合无法进行。这种掩盖可以通过一种称为抗原修复/抗原去掩蔽的技术来逆转,该技术可以通过加热(HIER;热诱导抗原修复)或蛋白酶(PIER;蛋白水解诱导抗原修复)介导。后者使用蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶等酶。PIER方法通过降解掩盖表位的肽而起作用。然而,PIER也可能导致样品形态或抗原本身的改变。因此,PIER的使用频率低于HIER,后者通过恢复表位的二级和三级结构而起作用。为了确定是否应该进行抗原修复以及采用哪种方法,应遵循以下指南:进行文献检索,以确定其他研究人员如何可视化您感兴趣的抗原。检查抗体供应商是否推荐了特定的抗原修复-方案。如果没有特定的协议可用,我们建议使用HIER而不是PIER协议。对于HIER,总是使用中性抗原修复缓冲液,并与未进行抗原修复的样品进行比较。如果中性染色溶液没有产生良好的染色效果,则应测试碱性或酸性抗原修复缓冲液。除了pH值外,其他需要优化的参数是温度和持续时间。理想情况下,尝试各种pH值、温度和时间组合。为了排除由HIER过程引起的伪影,始终包括一个控制样品,该样品在没有HIER步骤的情况下进行染色。 问题二:如何选择IHC实验的抗体,单克隆抗体还是多克隆抗体? 单克隆抗体和多克隆抗体的抗体特性决定了其优缺点。单克隆抗体是针对单个表位的同种免疫球蛋白。抗体是由一个动物的单个B细胞克隆产生的,因此在免疫化学上相似。多克隆抗体是针对同一抗原的各种表位的异质抗体混合物。抗体是由动物的不同B细胞克隆产生的,因此在免疫化学上不同。多克隆混合物中的抗体可能具有略微不同的特异性和亲和力。 如果蛋白质靶标具有相同的氨基酸序列,单克隆抗体更合适。一旦抗原因各种原因发生构象变化,如蛋白质相互作用、翻译后修饰、温度、pH值、固定、盐浓度等,单克隆抗体和抗原的联合作用将受到严重影响。由于多克隆抗体具有多个表位,不受蛋白质构象变化的影响,一般来说,在一定范围内的pH和盐浓度内,多克隆抗体之间的抗原结合比单克隆抗体更稳定。 问题三:一抗的孵育时间多久?一抗的孵育时间与温度,抗体浓度有关。一般情况下,在37℃的条件下,孵育1-2小时左右。在室温的条件下,孵育3小时左右。在4℃的条件下,孵育18-24小时左右。 义翘神州提供石蜡切片免疫组化(IHC)检测服务,更多免疫组化的问题可以上义翘神州网咨询!https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service
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