2025-01-10 10:49:44蛋白纯化柱
蛋白纯化柱是生物实验中的关键工具,用于从复杂生物样本中分离和纯化特定蛋白质。它基于蛋白质与柱材料的相互作用原理,如亲和层析、离子交换层析、疏水层析等。通过选择合适的柱材料和缓冲条件,可实现目标蛋白的高效、高纯度分离。蛋白纯化柱广泛应用于科研、制药及生物技术领域,对蛋白质的结构研究、功能分析以及药物开发具有重要意义。其操作简便,重复性好,是蛋白质纯化不可或缺的设备。

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2024-01-18 16:05:57蛋白纯化中的DTT:作用与应用
在生物科学领域,蛋白质纯化是一个至关重要的过程,它有助于获取单一、高纯度的蛋白质,以便进行结构和功能分析。在这个过程中,二硫苏糖醇(DTT)作为一种常用的还原剂,扮演着不可或缺的角色。本文将详细探讨DTT在蛋白纯化中的重要作用。 一、DTT的作用机制 DTT是一种小分子化合物,具有很强的还原能力。其主要作用是还原蛋白质中的二硫键。在蛋白质中,二硫键的形成对于维持蛋白质的高级结构和功能至关重要。然而,在进行蛋白质纯化时,这些二硫键有时会成为障碍,影响蛋白质的分离和纯化。此时,DTT就派上了用场。通过与二硫键反应,DTT能够将其还原为巯基,从而打破原有的二硫键,降低蛋白质的聚合倾向,使其更容易进行后续的纯化步骤。 二、DTT在蛋白纯化中的应用 打破二硫键:在许多蛋白质中,二硫键的形成维持了蛋白质的高级结构。在纯化过程中,为了更好地分离和纯化蛋白质,需要打破这些二硫键。DTT的引入可以有效地实现这一目标。防止蛋白质聚合:某些条件下,蛋白质可能会发生聚合,这会影响纯化的效果。DTT可以通过还原二硫键,降低蛋白质的聚合倾向,从而提高纯化的效率和效果。辅助蛋白质的分离和纯化:在某些情况下,蛋白质的电荷性质会因为二硫键的存在而受到影响,这会影响到蛋白质在电泳或离子交换等分离技术中的行为。此时,DTT可以改变蛋白质的电荷性质,使其更容易被分离和纯化。 三、使用DTT时的注意事项 虽然DTT在蛋白纯化中具有广泛的应用,但使用时仍需谨慎。首先,DTT具有一定的还原性,可能会影响某些实验的准确性或导致非特异性反应。因此,在使用DTT处理蛋白质样品时,应充分考虑其对实验的影响。其次,DTT的处理时间、浓度等条件需要进行优化,以避免对目标蛋白造成不必要的修饰或破坏。最-后,处理过的蛋白质样品应及时进行下一步分析或保存,以避免重新形成二硫键或发生其他变化。 四、总结 总的来说,DTT在蛋白纯化中起到了重要的作用,它能够还原二硫键、打破蛋白质的高级结构、降低蛋白质的聚合倾向等。然而,使用DTT时也需要注意其对实验的影响和可能带来的问题。未来随着研究的深入和技术的发展,我们期待更加高效、准确的蛋白纯化方法出现,为生物科学领域的研究提供更多可能性。 蛋白纯化详情可以关注义翘神州!https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification 义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索“义翘神州”与我们取得联系。 
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2021-07-16 10:36:04生物缓冲液在蛋白纯化中的选择
蛋白质的结构和功能需要在合适的pH值环境中才能维持,因此在蛋白的制备及纯化过程中,生物缓冲液的选择非常重要,只有合适的缓冲液才能保证蛋白的活性和结构稳定。蛋白纯化过程缓冲液作用用于蛋白纯化的缓冲剂有很多种,在维持体系的pH同时,要保证蛋白在纯化过程中不能失活,或者是尽量减少蛋白失活的量,在蛋白纯化的每一个步骤中都要保持蛋白的可溶性和活性。蛋白纯化缓冲液要求蛋白纯化过程中的缓冲液既要防止蛋白降解,也要防止蛋白聚合,其对实验结果影响显著。在选择和试剂缓冲液时应考虑以下几个因素:pH值、缓冲体系、盐离子、还原剂和稳定剂。其中每一个因素都要根据所纯化的目标蛋白进行优化,并以目标蛋白的活性作为优化的评估标准。了解蛋白稳定性条件蛋白的种类很多,不同的蛋白适应的pH值有差异,需根据其最适pH值来选择缓冲液。很多时候采用的是pH是7.4,这是模仿的生物条件,大多数蛋白在这个pH值下是稳定的。不过也有一些是例外的,这就需要调整pH值,以保持蛋白是可溶的且不会降解。蛋白纯化常用的缓冲剂蛋白纯化过程中常用的缓冲液有Tris、Tricine、Bis-Tris、MOPS等,其中普遍的是用Tris,它的缓冲范围接近生理pH值,且有着较低的离子强度,是蛋白质的良好溶剂,能保证蛋白的稳定性。需注意的是配制缓冲液时,尽量避开目标蛋白的等电点pl。因为蛋白在其等电点的pH溶液中表面没有静电荷,带百分子间排斥力减小,容易聚集,溶解度降低。现在需纯化的蛋白的适应pH值、等电点、以及缓冲液的缓冲范围都是可以查到的,直接按对应要求匹配即可。德晟是体外诊断试剂生产型企业,可提供大包装的生物缓冲剂Tris、MOPS、Bicine等。 
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2023-05-30 15:06:03CNW液相柱新品来袭:CNW Athena XPH-C18 ——一款耐受极端碱性流动相的长寿命液相柱!
CNW Athena XPH-C18是一款由安谱实验自主研发,专用于高pH流动相和高温的液相色谱柱。该色谱柱采用了特有的杂化硅胶合成技术及三键键合技术,可以耐受1- 12的流动相pH 范围 ,在高pH流动相(pH>7)和高温条件下具有优异的稳定性和耐用性。产品特点自主研发,质控严格耐极端碱性、高PH流动相稳定性好,寿命长色谱柱参数安谱实验对新款XPH-C18色谱柱进行了严格的寿命测试,结果表明,CNW Athena XPH-C18在高 pH 流动相(pH 10.0)条件下冲洗 500h 后,其柱效仍保持在初始柱效的80%以上;在高 pH 流动相(pH 8-10)和高温 (柱温 65℃)条件下,进RNA待测样品2000针后仍保持良好的分离选择性。接下来,就由小编给大家分享实验过程吧~高pH流动相冲洗测试——寿命500h+谱图:图1、Athena XPH-C18 性能监测 (高 pH 流动相冲洗 0、100、200、300、400 和 500h后柱效测试谱图对比)图2、 Athena XPH-C18 性能随高 pH 流动相冲洗时间的变化结论:从图1和图2可以看出,经过高pH 流动相冲洗 500h的整个过程中,苊的保留时间、拖尾因子、 柱效保持优异的稳定性,三项测试指标的RSD 均<5% ,Athena XPH-C18 在高 pH 流动相中具有极好的耐用性。RNA样品分离测试——寿命2000针+(数据由某知名生物医药公司分享)测试条件:流动相100mM TEAA 缓冲盐;pH 8- 10;柱温 65℃谱图:图3、Athena XPH-C18 和进口W 品牌 X-C18保留性能和分离度对比图4、 Athena XPH-C18 进样第1针和 2000 针后保留性能和分离度对比结论:从图3和图4可以看出,Athena XPH-C18和进口W 品牌X-C18具有接近的保留性能和分离度选择性;在100mM TEAA 缓冲盐流动相体系 (pH 8- 10) 和高温 (柱温 65℃) 条件下,进样2000针后, Athena XPH-C18 仍保持良好的分离选择性。 订购信息
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2024-11-13 15:14:01柱后衍生系统的原理是什么?柱后衍生的作用有哪些?
柱后衍生系统(Post-Column Derivative System)是一种广泛应用于液相色谱分析中的技术,旨在提高分离效果与检测灵敏度。该技术通过在色谱柱分离后,增加一个衍生反应步骤,允许分析物与试剂反应生成新的衍生物,从而增强其在检测仪器中的可检测性。本文将深入探讨柱后衍生系统的基本原理、应用场景及其对分析精度的提升作用。核心原理及工作机制柱后衍生系统的核心原理是通过化学反应对分析物进行衍生化,衍生后的化合物通常具有更强的吸光度、荧光性或更高的质谱响应,使得原本难以检测或响应较弱的化合物变得更容易检测。具体来说,色谱分析物在分离出色谱柱后,与特定的衍生试剂发生反应,这一反应通常发生在柱后设备中。此过程常常依赖于特定的反应条件,如温度、pH值和反应时间等,确保反应的选择性和高效性。柱后衍生系统的组成与工作流程柱后衍生系统的主要组成部分包括色谱柱、柱后衍生装置和检测器。在整个系统中,液相色谱柱负责分离混合物中的各组分,柱后衍生装置负责对分离出的各组分进行衍生化反应,而检测器则负责检测反应后的产物。具体工作流程如下:样品进样与分离:样品通过液相色谱系统进入色谱柱,并在柱内根据分子间的相互作用力进行分离。柱后衍生化反应:分离后的各组分流经柱后衍生装置,与预设的衍生试剂发生反应。此过程通常在特定的温控系统下进行,以保证衍生化反应的完整性和效率。产物检测与分析:衍生化产物进入检测器(如荧光检测器或质谱仪),通过对比分析信号强度与标准曲线,进行定性与定量分析。柱后衍生系统的应用柱后衍生技术具有广泛的应用价值,尤其在复杂样品的分析中,能够显著提高检测灵敏度。常见的应用领域包括:环境监测:如水质、空气中的有害物质检测,柱后衍生技术能提高某些污染物的检测限,使其更适用于低浓度分析。食品与药品检测:例如,食物中的添加剂、农药残留以及药品中的微量成分分析,柱后衍生化有助于识别和量化这些物质。临床分析:在生物样品(如血液、尿液)中,柱后衍生化技术能增强某些生物标志物的响应,有助于疾病诊断和监测。优势与挑战柱后衍生系统大的优势在于其能够有效提高难以直接检测物质的灵敏度和选择性。这一技术也并非没有挑战。衍生反应的选择性和反应条件必须得到精确控制,稍有不慎可能会影响分析结果的准确性。某些试剂可能存在毒性或不稳定性,使用时需要谨慎处理。
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2024-11-13 15:37:47柱后衍生系统哪些公司在做,柱后衍生化可改善色谱分离吗?
液相柱后衍生系统在高效液相色谱(HPLC)分析中扮演着关键角色,通过在色谱分离之后进行衍生反应,显著提高了目标化合物的检测灵敏度和准确性。以下是一些生产柱后衍生系统的公司:通微公司:该公司提供PCD-3000柱后衍生系统,采用模块化设计的衍生泵和反应器,配置灵活,可提供一级柱后衍生系统和二级柱后衍生系统供您选择,满足不同柱后衍生实验操作的需求。大连依利特分析仪器有限公司:该公司也提供多种柱后衍生系统,如P1200型柱后衍生仪等,适用于多种应用领域。Waters Corporation:作为领先的分析仪器制造商,Waters也提供了先进的柱后衍生解决方案,以满足不同领域用户的需求。Agilent Technologies:另一家知名的分析仪器制造商,同样提供高质量的柱后衍生系统,广泛应用于制药、环保、食品等领域。Thermo Fisher Scientific:该公司在分析仪器领域拥有深厚的技术积累,其柱后衍生系统以高性能、高稳定性著称,受到广大用户的青睐。Shimadzu Corporation:日本岛津公司也是一家知名的分析仪器制造商,其柱后衍生系统在技术上不断创新,为科学研究和工业生产提供了有力支持。柱后衍生化对色谱分离的影响柱后衍生化对色谱分离本身没有直接影响,但它可以间接改善色谱分离的效果。具体来说,柱后衍生化通过以下方式影响色谱分离:提高检测灵敏度:柱后衍生化可以将原本难以直接检测的化合物转化为易于检测的物质,从而提高检测灵敏度。这有助于更准确地识别和定量色谱峰,尤其是在复杂样品基质中。减少干扰物质的影响:通过柱后衍生化,可以选择性地改变被测物的物理或化学性质,使其与干扰物质区分开来,从而减少干扰物质对检测结果的影响。增强分离效果:在某些情况下,柱后衍生化可以使原本难以分离的化合物产生不同的衍生物,这些衍生物在色谱柱上的保留行为可能有所不同,从而实现更好的分离效果。但需要注意的是,这种分离效果的改善通常是针对特定化合物而言的,并非对所有化合物都适用。
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