2025-01-10 10:53:44外泌体提纯
外泌体提纯是从复杂生物样本中分离并纯化外泌体的过程。它通常涉及多个步骤,包括样本预处理、初步分离、进一步纯化等,以确保获得高纯度、高活性的外泌体。提纯过程中会运用先进的过滤、离心、超滤等技术,以去除杂质和污染物。外泌体提纯在科研、临床诊断及药物研发等领域具有广泛应用,对于深入探究外泌体的功能和作用机制具有重要意义。

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2023-05-11 11:20:33直播 | 深入外泌体: 冷冻电镜下的新一代药物递送载体
细胞排出废物的“垃圾桶”,到如今科研界热度居高不下的宠儿,外泌体在某种意义上完成了质的飞跃。外泌体是细胞分泌到胞外的一种囊泡(Extracellular Vesicles,EVs),其大小为30-150nm,具有双层磷脂膜结构,含有丰富的内含物(包含蛋白质、核酸等多种活性生物分子)。外泌体应用于疾病诊断、药物装载等方面,它穿透性极强、吸收更佳、低免疫原性,使得它成为了非常优质的“活性物质递送系统”。外泌体由蛋白质、核酸、脂质组成,含有较高水平的胆固醇、鞘磷脂及饱和脂肪酸。相比其他载体,外泌体在递送药物方面有着显而易见的优势:①外泌体的安全性非常高;②外泌体有非常好的靶向性潜力;③外泌体具备工程改造潜力;④外泌体有优秀的多分子装载能力。药物递送系统(DDS)的表征是新药研发致关重要的一个环节,反应DDS 的特性。冷冻电镜是外泌体直观表征的不二利器,通过将外泌体样本快速冷冻,可以获得外泌体近生理状态下形貌信息细节,直接表征多项指标;还可以通过冷冻电子断层扫描技术获得外泌体近生理状态下的3D结构,为新药开发打开纳米世界的大门。随着冷冻电镜技术的不断发展,已经突破分辨率极限,达到原子级别。冷冻电镜技术对外泌体的探究越来越细致,为了更深入的走进外泌体,了解冷冻电镜下的新一代药物递送载体,药融圈联合赛默飞共同邀请到苏州唯思尔康科技有限公司SVP何新军以及赛默飞世尔科技材料与结构分析业务拓展经理刘靖怡2位行业专家,于2023年5月18日做客线上直播间,揭开外泌体的神秘面纱。
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2024-01-15 17:30:19包涵体蛋白复体常见十大问题解析
在生命科学领域中,包涵体复体的研究占据了重要的地位。但随着研究的深入,一些问题逐渐浮现。本文将对包涵体复体研究中常见的挑战进行解析,以及为研究者提供一些解决思路。  ①包涵体复性原则:低浓度,平缓梯度,低温。 ②怎样洗涤包涵体?通常的洗涤方法一般是洗不干净的,可以先把包涵体用6M盐酸胍溶解充分,过滤除去未溶解的物质,注意留样跑电泳,然后用水稀释到4M,离心把沉淀和上清分别跑电泳,如此类推可以一直稀释到合适的浓度,可以找到一个合适去除杂质的办法,其实这就是梯度沉淀的方法,比通常的直接洗脱效果好。 ③对于尿素和盐酸胍该怎么选择尿素和盐酸胍属中强度变性剂,易经透析和超滤除去。它们对包涵体氢键有较强的可逆性变性作用,所需浓度尿素8-10M,盐酸胍6-8M。尿素溶解包涵体较盐酸胍慢而弱,溶解度为70-90%,尿素在作用时间较长或温度较高时会裂解形成氰酸盐,对重组蛋白质的氨基进行共价修饰,但用尿素溶解具有不电离,呈中性,成本低,蛋白质复性后除去不会造成大量蛋白质沉淀以及溶解的包涵体可选用多种色谱法纯化等优点,故目前已被广泛采用。 盐酸胍溶解能力达95%以上,且溶解作用快而不造成重组蛋白质的共价修饰。但它也有成本高、在酸性条件下易产生沉淀、复性后除去可能造成大量蛋白质沉淀和对蛋白质离子交换色谱有干扰等缺点。 ④8M尿素溶解的包涵体溶液应如何保存?在4度放置半个月,都没什么问题 。在室温放置超过48小时,可能会对目的蛋白有影响,因为尿素在碱性条件下可使一些氨基酸酰基化,所以早些处理BI溶液比较好。 ⑤复性时的蛋白浓度一般使用浓度为0.1-1.0mg/ml,太高的浓度容易形成聚体沉淀,太低的浓度不经济,而且很多蛋白在低浓度时不稳定,很容易变性。 ⑥蛋白复性后浓度低蛋白可能是在复性的过程中发生降解了。 可以将复性好的蛋白浓缩一下泡胶看看。复性过程一般都是低浓度蛋白,需要保证分子间有足够的折叠空间。一些未正确折叠的蛋白就存在于沉淀中,可能沉淀看不出来,复性后的蛋白高速离心看看。 ⑦复性中蛋白析出是怎么回事?该怎么处理?出现蛋白析出,肯定是条件变化太剧烈了。 复性应该采取复性液浓度和PH值逐渐变化的方法,例如根据包涵体的溶液成分,每隔1个PH或浓度值配置一种溶液,逐步透析到正常。此外透析时必须浓度极低,条件温和,使蛋白质能够正确折叠。但是复性的比率应该很低。 若加变性剂尿素可加到2M,盐酸胍可加到1-1.5M; 另外可将甘油浓度增加,范围可在≤30%,且在复性样品中也可加适量甘油。 ⑧复性效果的检测根据具体的蛋白性质和需要,可以从生化、免疫、物理性质等方面对蛋白质的复性效率进行检测。 凝胶电泳:一般可以用非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳可以检测变性和天然状态的蛋白质,或用非还原的聚丙烯酰胺电泳检测有二硫键的蛋白复性后二硫键的配对情况。光谱学方法:可以用紫外差光谱、荧光光谱、圆二色性光谱(CD)等,利用两种状态下的光谱学特征进行复性情况的检测,但一般只用于复性研究中的过程检测。色谱方法:如IEX、RP-HPLC、CE等,由于两种状态的蛋白色谱行为不同。生物学活性及比活测定:一般用细胞方法或生化方法进行测定,较好的反映了复性蛋白的活性,值得注意的是,不同的测活方法测得的结果不同,而且常常不能完全反映体内活性。黏度和浊度测定:复性后的蛋白溶解度增加,变性状态时由于疏水残基暴露,一般水溶性很差,大多形成可见的沉淀析出。免疫学方法:如ELISA、WESTERN等,特别是对结构决定簇的抗体检验,比较真实的反映了蛋白质的折叠状态。 ⑨变性的融合蛋白可以制备多抗或者单抗吗?变性蛋白只是天然蛋白伸直的产物,用来免疫动物具有更强的抗原性。只是天然蛋白中被包在内部的抗原决定簇也会暴露出来,如果用该变性抗原制备的抗体来检测变性抗原是可以的,如果用来检测天然蛋白,可能会有假阳性。做单抗也可以,同样道理,筛选出的单抗可能对抗的抗原决定簇处于天然抗原的内部,是否能用还要看将来该单抗用来干什么。 ⑩纯化后的可溶性融合蛋白可以直接用于制备多抗吗?免疫动物要求抗原体种尽量小。在这种小体积的情况下,缓冲液里的小分子成分只要没毒影响就不大,可以不用考虑。 更多蛋白复体详情可以上义翘神州网咨询!
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2025-02-01 09:10:16金相显微镜能不能测粉体
金相显微镜能不能测粉体? 金相显微镜作为一种用于观察金属样品的显微分析工具,广泛应用于材料科学和金属研究中。它能够通过对金属表面的观察,帮助研究人员了解金属的组织结构、相组成及晶粒大小等重要信息。当我们将其应用到粉体测量上时,是否能获得理想的效果?本文将深入探讨金相显微镜能否有效测量粉体,并分析其中的技术挑战与局限性。 金相显微镜的基本原理与应用 金相显微镜通过将样品制备成适合观察的薄片,借助不同的显微镜镜头和光源进行观察,从而获取材料的微观结构信息。通常,这类显微镜配备了高分辨率的光学系统,能够清晰呈现金属材料表面不同相区的结构特征,广泛应用于金属铸造、焊接、热处理等领域,帮助研究者了解材料的性能变化。 粉体的特殊性与金相显微镜的适应性 粉体由于其颗粒形态的特殊性,相较于常规的金属样品,更难通过传统金相显微镜进行观察。粉体材料的颗粒大小、形状、分布等特征对于显微镜的观察提出了更高的要求。金相显微镜主要适用于平整、稳定的固体表面观察,而粉体由于其颗粒形态和尺寸的不规则性,难以获得清晰的观察结果。粉体样品的制备过程通常需要将其制成薄片或者通过特殊处理固定,才能进行显微镜分析。 金相显微镜在粉体分析中的局限性 粉体的颗粒尺寸通常较小,且形状不规则,传统金相显微镜的分辨率和观察角度可能无法完全呈现颗粒的全貌。金相显微镜在观察粉体时需要样品表面平整,如果没有经过特殊的样品制备,观察效果可能会受到影响。再者,由于金相显微镜主要侧重于观察金属的微观结构,而粉体的形态和表面特性常常需要借助其他显微技术(如扫描电子显微镜 SEM)来获得更为的分析结果。 结论 金相显微镜虽然可以对粉体进行一定程度的观察,但由于粉体的颗粒特性、样品制备难度及金相显微镜的局限性,它并非粉体分析的佳选择。若要获得更高精度的粉体表征,推荐使用扫描电子显微镜(SEM)等其他更为适合粉体分析的仪器。
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2025-01-13 18:00:16熔体流动速率仪多少钱
熔体流动速率仪(MFR仪)是一种广泛应用于塑料行业的测试设备,主要用于测定塑料在熔融状态下的流动性能。熔体流动速率仪的价格受多种因素的影响,包括品牌、性能、精度、功能等。熔体流动速率仪到底多少钱呢?本文将对其价格影响因素进行分析,并为您提供市场上的价格参考,帮助您做出更明智的购买决策。 熔体流动速率仪的价格会受到品牌的影响。市场上有很多不同品牌的熔体流动速率仪,知名品牌如Instron、Zwick和Tinius Olsen等通常会定价较高,主要因为其在产品质量、技术支持和售后服务方面具备优势。相对而言,国内品牌和一些小品牌的设备价格会更具竞争力。 熔体流动速率仪的价格与其性能和功能直接相关。普通的基础型熔体流动速率仪一般价格较低,但它们只能提供较为基本的流动速率测量功能。随着设备的技术更新和功能增强,如自动化程度的提高、更高的精度、更强的数据处理能力等,这些高端设备的价格会显著上升。例如,某些高精度型号或带有自动测试程序的设备,价格可能会达到几万元甚至更高。 设备的测量范围和应用领域也影响其定价。如果是用于高端科研或特殊行业的设备,如需要测量更广泛的温度和压力范围的熔体流动速率仪,其价格自然会更高。设备的配件和额外功能,如数据采集系统、温控系统等,也会增加成本。 根据市场调研,目前市场上的熔体流动速率仪价格大致在几千元到几万元之间。普通的入门级设备价格大约在5000元至15000元之间,而一些高端、精密型设备则可达到30000元以上,甚至接近50000元。价格差异主要取决于设备的技术规格、品牌和功能需求。 选择合适的熔体流动速率仪时,除了关注价格,还需要综合考虑设备的技术参数、应用场景、售后服务等多方面的因素。购买时,建议根据自身需求选择性价比高的设备,避免盲目追求低价或高价。购买前一定要与供应商进行充分沟通,确保设备的稳定性和准确性,保障测试结果的可靠性。 总而言之,熔体流动速率仪的价格因品牌、功能、精度等多种因素而有所不同,市场上的价格区间也较为广泛。在选购时,了解设备的各项技术指标及自己的实际需求,才能做出理智的购买决策。
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2025-01-13 18:00:16熔体流动速率仪怎样加热
熔体流动速率仪怎样加热 熔体流动速率仪(Melt Flow Rate, MFR)是塑料行业常用的一种测试仪器,用于测量塑料熔融状态下的流动性能。测试结果不仅能帮助判断塑料的加工性能,还能为材料的选用和工艺优化提供依据。为了确保测量数据的准确性和仪器的稳定性,熔体流动速率仪的加热过程至关重要。本文将详细探讨熔体流动速率仪的加热方式及其在操作中的重要性。 熔体流动速率仪的加热方式 熔体流动速率仪的加热系统通常包括加热元件、温控系统以及热平衡设计。这些加热系统的作用是确保在测试过程中,熔体保持在规定的温度范围内,从而保证测试结果的准确性和可靠性。加热过程通常分为以下几个步骤: 预热阶段:在进行测量前,首先需要将熔体流动速率仪的测试腔体加热至规定的温度。这个阶段的加热方式通常采用电加热,通过温控系统对加热元件的温度进行精确调节。为了确保温度稳定,通常会对加热元件进行隔热设计,避免外界温度的干扰。 恒温阶段:达到预设温度后,仪器会进入恒温阶段,持续维持恒定的加热温度。这一阶段需要温控系统能够精确控制温度的波动,通常通过PID温控算法实现,以确保温度稳定并减少实验误差。 热平衡设计:为了实现均匀加热,熔体流动速率仪的设计通常会加入热平衡装置,使得整个加热腔体内的温度分布均匀。这能有效避免温度梯度导致的误差,从而提高测试的精确度。 熔体流动速率仪加热中的关键因素 在熔体流动速率仪的加热过程中,有几个关键因素对测试结果产生直接影响。首先是温度的均匀性,任何温度分布的不均衡都会导致熔体流动速率的测量误差。设备的加热速度也很重要,快速加热有时可能会导致仪器过热或不稳定,因此控制加热速率至关重要。温控系统的精度也直接影响测试数据的准确性。良好的温控系统能有效保持温度波动在极小范围内,确保实验的稳定性。 总结 熔体流动速率仪的加热过程涉及到精确的温控技术与设计,通过精确的加热和温度控制,确保测量结果的可靠性。了解加热过程中的关键因素,能有效避免误差,提高测试的准确度和效率。正确操作并合理维护加热系统,是确保熔体流动速率仪高效工作的基础。
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