在基因治疗领域中，高质量的质粒DNA是用来制备AAV、LV等病毒载体的重要原料，随着近些年临床用量需求的不断增加，对生产纯化工艺提出了更高的要求。本期推文内容是东曹色谱产品在质粒纯化中的实际应用案例分享。
文献介绍
Improved downstream process for the production of plasmid DNA for gene therapy
文献内容要点：
图1. pDNA生产工艺的步骤及其功能
图2是使用阴离子交换色谱柱TSKgel DNA-NPR (4.6mmI.D.×75 mm, 2.5 μm) 对通过溶菌作用获得的粗提质粒DNA进行分离的谱图。质粒DNA的拓扑异构体按照oc形式、ccc形式、linear形式、二聚体 (多聚体) 的顺序依次洗脱出来。
图2. 质粒DNA拓扑异构体的HPLC色谱图
HIC是去除开环pDNA、残留RNA和内毒素等杂质最有效的层析步骤。研究人员在将HIC作为捕获步骤的工艺中使用了TOYOPEARL Butyl-650M疏水填料 (图3)，并使用TSKgel DNA-NPR色谱柱进行纯度分析。
表1是实验室规模和工业规模的数据，在经过HIC+AIEC+SEC的三步层析后，获得了高纯度的药用级pDNA：高达98%的超螺旋、回收率＞50%。
图3. 质粒的HIC纯化步骤
分离条件：
填 料: TOYOPEARL Butyl-650M
吸附流速: 120 cm/h
洗脱流速: 75 cm/h
A buffer: 0.1 M Tris+0.01 M EDTA+2.8 M 硫酸铵 (pH 7)
B buffer: 0.1 M Tris+0.01 M EDTA (pH 7)
表1 实验室规模和工业规模的原料药数据
参考文献
1. Ref.: J. Urthaler et al., Acta Biochmica Polonica, 52(2005)703-711
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