FITC-Dextran(异硫氰酸荧光素-葡聚糖)的使用指南

FITC-Dextran，又称异硫氰酸荧光素-葡聚糖、FITC-葡聚糖、FITC标记葡聚糖、FITC-右旋糖酐、是一种异硫氰酸荧光素 (FITC)标记的葡聚糖荧光探针，可用于评估体内/体外大分子对半透膜的通透性、心血管、微循环、细胞单层空隙/运动、灌注、细胞膜渗透性、细胞内吞、结肠炎等研究。

Dextran是一种亲水性多糖，分子量从1 kDa到40,000 kDa、具有良好的水溶性、低毒、低免疫原性、惰性等特点；Dextran通过不常见的α-1,6糖苷键连接，可以避免大多数内源性细胞糖苷酶的切割，因而Dextran conjugates（葡聚糖偶联物）是一种较为理想的活细胞长期示踪剂。

FITC-Dextran系列产品的标记效率约为相当于每个葡萄糖分子中有0.002-0.008个FITC分子标记，即0.002-0.008 moles of FITC per mole of glucose unit，低水平的替换确保葡聚糖最小的结构变化。

1.CAS号：60842-46-8；
2.分子量：~ 40000 KDa (Average)；
3.外观：类黄色或橙黄色粉末；
4.溶解性：溶于水：25 mg/mL，透明至微浑浊，橙黄色；溶于盐溶液；也可溶于DMSO、甲酰胺和其他极性有机溶剂，但不溶于低脂肪族醇、丙酮、氯仿和二甲基甲酰胺等。

图1. FITC-Dextran结构式示意图

Dextran conjugates（葡聚糖偶联物）包括FITC-Dextran，在很多领域有着广泛的应用价值： 

1. 研究细胞膜相关：通道孔径大小、细胞膜通透性等；

2. 植物细胞壁通透性、细胞壁孔隙率；

3. 毛细血管通透性、渗透性（血浆蛋白已被证明不与FITC葡聚糖结合）；

4. 细胞质基质的流体力学特性；

5. 动物灌注实验，研究缺血再灌注损伤(Ischemia-reperfusion injury) ；

6. 血脑屏障完整性研究；

7. 肾脏、肠道功能性研究；

8. 神经领域，研究树突组织以及突触相互作用的情况；

9. 研究细胞间结构：细胞间隙连接(Gap junctions)、细胞质桥(Cytoplasmic bridges)等；

10. 细胞内吞作用、渗透作用、细胞连接通透性、细胞单层孔隙率、细胞层内的顶端基底外侧运动、（小分子，比如20KD，40KD等）；

11. 用于疾病如肿瘤等研究，药物偶联的右旋糖胺可以既降低细胞毒性，又增强药效性，可研究控制药物靶向情况；

12. FITC-葡聚糖对PH较为敏感，可用于研究环境酸化(Acidification)情况；

13. 作为示踪剂等相关其他研究如微循环、血流、伤口愈合等过程。

产品使用说明

肠道细菌及毒素的移位可能是自身免疫性疾病发病的重要因素，手术、压力、胃肠道疾病等会显著增加粘膜通透性，也会增加细菌从肠粘膜进到人体的机会，利用FITC-Dextran（比如：FITC-Dextran (MW 40000) FITC标记葡聚糖(MW 40000)）可以很简便快捷的评估细胞膜通透性，研究细胞膜功能以及胃肠道疾病。

【Dextran的分子量、电荷数、标记情况、偶联物等都可能会对实验造成影响，使用浓度和作用时间请参考相关文献，并根据自身实验条件（如实验目的，细胞种类，培养特性等）进行摸索和优化，以下使用浓度和操作步骤仅供参考。】

体内实验操作方案（仅供参考）

1.配置FITC-Dextran溶液：0.05 M磷酸盐溶液(PBS)溶解化合物，充分震荡溶解，配置成25 mg/mL浓度；

2.饲喂前和实验过程中，禁食小鼠4小时；

3.口服配置好的FITC-Dextran溶液 (20 mL/kg)；

4.3小时后，收集血浆（具体时间因动物而异）；

5.使用PBS按照1：2（或更大）比例稀释血浆；

注意：1. 样品中的蛋白质可能干扰并降低荧光强度(FI)。因此，为了准确测定FITC-Dextran的渗透性，血浆与PBS的比例必须在所有样品中保持一致。2. 建议用系列稀释的FITC-Dextran制成标准曲线，用于定性研究。
6.取50 μL或100 uL稀释的标准品和样品转移到黑色96孔板上，并在荧光读取器中读取荧光值。Ex（激发）：490 nm，Em（发射）：520 nm。波长带宽（激发和发射）：9 nm。

建议使用12.5 μg/mL ~ 0.2 μg/mL浓度范围作为标准范围，并进行标准曲线的绘制。为了制备标准稀释液，建议使用与样品相同比例的正常小鼠血浆与PBS的稀释剂。例如，如果使用1:2稀释液进行样品稀释，在0.05 M PBS中制备33%浓度（300 μL血浆中加入600 μL PBS）的正常小鼠血浆作为稀释剂。

1. 取10 μL 25 mg/mL的FITC-Dextran，加入990 μL的PBS。（FITC-Dextran终浓度：250 μg/mL）；
2. 取12.5 μL稀释后的FITC-Dextran，加入237.5 μL用0.05 M PBS稀释配置好的33%正常小鼠血浆。（FITC-Dextran终浓度：12.5 μg/mL）；
3. 取125 μL的步骤2的终浓度为12.5 μg/mL溶液与等体积（125 μL）的33%小鼠正常血浆混合。（FITC-Dextran终浓度：6.25 μg/mL）；
4. 继续按照上述步骤，稀释配置FITC-Dextran终浓度为3.13 μg/mL、1.56 μg/mL、0.78 μg/mL、0.39 μg/mL和0.20 μg/mL标准溶液；
5. 取50 μL或100 μL稀释的标准品和样品转移到黑色96孔板上，并在荧光读取器上读取；
6. 从标准品和样品的FI值中减去FI空白值（空白值：0.05 M PBS配置的33%正常小鼠血浆）；
7. 将标准品的FI值（纵坐标）相对于FITC-Dextran标准品的浓度（12.5, 6.25, 3.13, 1.56, 0.78, 0.39, 0.20 μg/mL）数值（横坐标）进行绘图。使用对数/对数图来分析处理数据，可以使数据线性化。

3种荧光标记葡聚糖的区别

3种（FITC-Dextran、Antonia Red-Dextran、TRITC-Dextran）荧光标记葡聚糖的区别

注意事项

1.FITC-Dextran溶液高温高压灭菌可能引起荧光素的释放，建议使用过滤方式除菌；
2.荧光物质易发生淬灭，请注意避光使用和保存；
3.粉末配制溶液时，如有需要，可以涡旋振荡、超声或加热（40-60ºC）助溶。若有不溶物，可短暂离心处理；
4.配制成储存液后，可以0.22 μm滤膜过滤除菌，或酌情添加叠氮化钠(Sodium azide)（终浓度2 mM）抑制微生物生长（不是必需）；
5.Dextran的分子量、电荷数、标记情况、偶联物等都可能会对实验造成影响，使用浓度和作用时间请参考相关文献，并根据自身实验条件（如实验目的，细胞种类，培养特性等）进行摸索和优化；
6.产品建议分装保存，避免反复冻融。

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