5个步骤掌握FISH技术：高效探索微生物世界

在进行FISH实验之前，首先需要设计并合成与目标微生物的特定基因序列互补的探针。这些探针通常带有荧光标签，以便在显微镜下进行可视化。

对于双链DNA探针，需要在实验前进行变性处理，将其转换为单链形式以便与目标序列进行杂交。这一过程通常在70℃-80℃的条件下进行约10分钟，随后迅速冷却以防止探针重新形成双链。

样品的固定是FISH实验中的关键步骤。通常使用4%的多聚甲醛作为固定液，以保持细胞的形态和结构完整性。固定后的样品需要经过一系列的脱水步骤，通常使用50%、80%和100%的乙醇进行处理。

在样品脱水后，滴加含探针的杂交液，并在湿盒中进行恒温杂交，时间一般为1-3小时，温度根据探针的设计选择在37-46℃之间。如果需要进行预杂交，可以先使用不含探针的杂交液进行处理，以减少非特异性结合。

杂交完成后，使用预热的清洗液进行漂洗，以去除非特异性杂交的探针。随后使用超纯水清洗并吸干样品，然后进行荧光显微镜下的观察。