德国PicoQuant的单光子计数共聚焦显微镜Luminosa是一款面向实验室、科研与工业现场的高灵敏成像平台,集成了先进的单光子探测、时间相关单光子计数(TCSPC)与共聚焦显微成像能力,适用于需要极低光强下的定量荧光、荧光寿命成像(FLIM)和纳米尺度表征的场景。其核心在于把高量子效率的单光子探测器、精密的扫描与强大数据处理结合起来,能够在复杂样品中实现高信噪比的定量分析。
核心参数与系统特性
- 光学与成像:采用共聚焦成像架构,支持多通道光路,典型场视野在25–80 μm之间,像素尺寸可在0.04–0.2 μm之间调整以匹配样品细节与信号强度。扫描系统可选直线扫描与共振扫速组合,线性扫描速度与扫描幅度可在实验条件下灵活设定。
- 激光与波长选项:光源覆盖常用的405、488、561、640 nm等激光波长,便于标记不同荧光探针。光路设计支持多模/单模耦合,便于在多色实验中实现稳定耦合与低损耗传输。激光重复频率通常在20–80 MHz范围内,样品处的平均功率可在0.1–100 mW级别调控以避免光漂白与热效应。
- 探测与信号:系统采用单光子探测器阵列(SPAD),多达4路并行探测,单通道探测灵敏度与量子效率在40%–75%级别(视波长与探测器型号而定)。高时间分辨性能有利于FLIM和时间分辨的荧光寿命分析,时间分辨误差通常在几十皮秒量级。
- 数据采集与分析:内置时间相关单光子计数架构,兼容TimeHarp系列TCSPC模块,常用的软件平台为SymPhoTime,支持时间标记数据的后处理、寿命拟合、FRET分析以及多通道相关分析。数据接口通常支持USB 3.0/以太网等传输,兼容常用工作站配置。
- 机械与环境:具备稳定的显微镜底座与可控的样品台,信息化控制接口便于与实验室的自动化工作流对接;设计强调热稳定性与振动抑制,便于长时重复性实验。
- 软件与兼容性:软件端提供多通道时间标记、荧光寿命拟合、FLIM映像功能,以及与其他 PicoQuant 硬件(如时间解析模块)的合成分析工具。用户可通过脚本接口实现自定义分析,便于工业品质控制与研发验证。
典型配置与型号变体(示例性参数,实际以官方规格为准)
- 基础配置(示例):
- 波长选项:405/488/561/640 nm;FOV:25 μm;像素尺寸:0.08 μm;通道:2路探测;时间分辨:约40–70 ps;扫描方式:局部共聚焦,线性扫速可调;激光功率:0.1–20 mW。
- 数据处理:TimeHarp 260 系列接口,SymPhoTime 基础分析功能,最大并行通道2路;输出格式:TIFF、CSV、TCSPC时间标记数据。
- 增强配置(示例):
- 波长选项与探测扩展:4 通道探测,支持多模/多光路切换,FOV扩展至80 μm,像素尺寸可调至0.04 μm以适应高分辨率需求;时间分辨率提升至40 ps 级别;激光重复频率保持在40–80 MHz,单通道功率可达50 mW。
- 软件升级:增强版SymPhoTime,支持多通道FLIM、全局拟合与FRET分析;TimeHarp 260X 接口,数据吞吐更高。
- 高通量/工业版(示例):
- 探测与通道:最多4路SPAD探测,FOV覆盖100 μm级别,像素尺寸优化为0.04–0.1 μm以提高分辨率与统计精度;扫描系统升级为混合型(机械与电子同步)以提高重复性与稳定性。
- 数据处理:多线程/并行分析,支持大规模数据集的批量处理;接口扩展到网络存储与厂内数据管理系统,便于品质控制与大规模样品生产线的日常检测。
场景化应用与优势要点
- 生物医学研究:在活细胞与固定样品中实现高灵敏的荧光寿命成像,便于定量分析蛋白相互作用、分子环境与能量转移效率。低光强下的单光子计数有助于减少光毒性与荧光漂白。
- 纳米材料表征:对稀薄荧光团、表面等离子体耦合或量子点发射进行时间分辨分析,获得寿命分布与动力学信息,提升材料特性的定量描述能力。
- 工业检测与质量控制:在透明或半透明材料的微观结构表征、材料降解与疲劳监测中,利用高信噪比的TCSPC信号实现稳定的定量评价,支持自动化检测流程。
- 联合实验工作流:同一平台可与其他 PicoQuant 硬件无缝衔接,通过脚本化分析实现从原始信号到量化结果的一站式工作流,便于研发与放大应用的快速迭代。
场景化FAQ
- Luminosa 适用于哪些样品类型?答:适用于活体与固定细胞、纳米材料、表面修饰的薄膜以及微观材料结构的定量荧光分析,特别是在需要灵敏度高、时间分辨能力强的场景表现突出。
- 如何在高背景噪声环境中获得稳定寿命信息?答:通过多通道并行探测和TCSPC时间标记,结合低光强激发条件与合适的滤光/窗口设置,提升信噪比,同时应用全局拟合和分布拟合来提取可靠的寿命参数。
- FLIM 与 FRET 实验如何集成?答:系统原生支持FLIM分析,结合多通道探测可实现FRET效率的定量获取,软件提供统一的拟合模型和统计评估以便对比不同条件。
- 数据处理流程通常包括哪些步骤?答:数据采集→时间标记归整→通道分离与背景扣除→寿命拟合或分布拟合→结果统计与可视化,必要时可导出为通用格式用于后续分析或报告。
- 设备维护与校准要点有哪些?答:定期进行探测器暗计数与时间偏移校准、光路对准与透过率测试、温控与振动稳定性检查,软件层面定期更新分析模型与参数库,以确保长期的一致性与可追溯性。
总结
Luminosa 将高灵敏单光子探测、精确时间分辨与强大数据分析整合到一套共聚焦显微系统中,面向对定量性与稳定性要求极高的实验场景。通过灵活的配置选项、丰富的波长与探测通道组合,以及成熟的软件分析生态,能够支持从基础研究到工业应用的广泛需求。若需要进一步的型号对比、具体参数表或定制方案,可以基于您的样品类型、所需寿命范围和通道数进行定制化沟通,以确保选型和测试方案的匹配。
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