什么是胎牛血清
胎牛血清是通过对未出生的胎牛进行穿刺采血，再经过一系列处理（如自然层析、离心、多级微滤等）后得到的上清液，其富含生长因子和营养成分，能够为细胞提供充足的能量和营养物质，以及促进细胞生长、保护细胞、提供蛋白酶抑制和贴壁因子等。
作为培养细胞的必需工具，胎牛血清的品质决定了细胞培养的成败。
什么是WB(Western Blot)
本文将围绕胎牛血清沉淀及培养中出现小黑点的情况，逐一解开大家心中的疑惑。
什么是WB(Western Blot)
Q
胎牛血清沉淀是什么？
胎牛血清解冻后发现浑浊及白色絮状物质，并且在充分摇晃混匀后也还存在，无需太过于担心，这属于正常现象。
常见的几种胎牛血清的沉淀：
1、纤维蛋白：血纤维蛋白是参与凝血过程的蛋白之一，血清中可能残留少量血纤维蛋白，其在解冻后也可能形成肉眼可观察到的、较大的达到1-2mm的沉淀物。越差的血清，沉淀越多，但好的血清在2-8℃条件下放1-2个月后也会出现少量的沉淀。
2、磷酸钙：常见的一种沉淀物，会造成胎牛血清浑浊，并且在37℃培养的时候会增加。
3、脂蛋白：脂蛋白在血清中可能因各种原因发生变性，从而形成沉淀。
4、血清融解时，由于冰块和蛋白融化的速度不一样，因此局部可能因蛋白浓度过高而产生沉淀。
Q
胎牛血清沉淀是污染吗？
上面介绍的几种常见的胎牛血清沉淀并不是污染。
如何判断胎牛血清是否被污染呢？比较有效的方法是通过将胎牛血清接种在细菌培养基上进行培养，观察是否存在细菌增殖，并且进行革兰氏染色，用油镜观察直接判断是否为微生物污染。
Q
胎牛血清产生沉淀需不需要去除？
胎牛血清沉淀的多少与胎牛血清质量不成正比。如有胎牛血清沉淀产生，不用特意去除，可以将胎牛血清放置一会，通过分装血清时，去掉最后少量的血清即可。若有少许沉淀进入，不会影响实验，但可能会影响视野/细胞接触抑制。如要完全去除沉淀物，可以在400-500g离心力下离心3min，去除大颗粒沉淀，取上清液使用即可。
温馨提醒：胎牛血清不建议过滤后使用，过滤可能会导致胎牛血清中部分营养成分的流失。
Q
胎牛血清沉淀会影响细胞生长吗？
胎牛血清出现沉淀是胎牛血清的正常特性，各类胎牛血清均有沉淀的出现，根据细胞培养测试经验，胎牛血清沉淀的多少与胎牛血清的使用效果没有必然关系。
Q
细胞培养过程中为什么会产生小黑点？
1、生产工艺
在细胞培养过程中加入胎牛血清出现了小黑点，并且随着培养过程小黑点越来越多，这与胎牛血清的生产工艺有很大关系。
目前胎牛血清的生产主要有两种工艺：
① 自然凝聚生产获得血清，该生产控制要求严格，自然凝集的胎牛血几乎不会出现小黑点。
② 离心生产血清，该工艺可能会导致小黑点的产生。
2、细胞老化
在细胞的表面出现小黑点，表明细胞老化，在细胞间隙间出现的小黑点，说明细胞营养不足导致细胞碎片化，需要更换细胞或者更换等级更高的血清。
3、实验污染
细胞培养中出现的小黑点也有可能是因为出现了污染。当有小黑点形成后判断是细胞污染还是细胞碎片，首先通过在镜下观察小黑点运动状态，很多会动的小黑点只是发生布朗运动的细胞碎片，而细菌在运动上则较为活跃和浮躁。然后判断培养基的浑浊程度，如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。
示例
无小黑点
有明显小黑点
Q
如何避免胎牛沉淀出现及培养基中小黑点的生成？
采用正确的解冻方法
1、2℃~8℃解冻；
2、解冻的过程中间断摇匀（隔一段时间轻柔摇匀）；
3、室温或者水浴溶解均易造成沉淀增多。
正确使用和保存
1、非必须不用热灭活（热灭活会使血清中部分蛋白质变性析出，影响血清品质）；
2、不宜37℃预热，血清和完全培养基通常室温预热即可；
3、避免反复冻融；
4、避免紫外线照射；
5、避免2-8℃长期保存，分装后-20℃长期保存，按需溶解。
Q
好的胎牛血清具备哪些品质？
1、高度纯净：血清经过多重过滤和净化，以确保其纯净度，适合各种细胞培养。
2、营养成分丰富：血清含有丰富的氨基酸、维生素和微量元素，能够满足细胞生长的各种需求。
3、良好的细胞适应性：血清已经被证明能够支持多种细胞的生长和分化，具有良好的适应性。
4、严格的质量控制：遵循严格的质量控制标准，确保每一批次的血清都符合最高的。
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