酶标仪长时间动力学读板模式助力微生物生长监测

然而，在酶标仪上运行这样一个长期连续动态读取的实验需要占用酶标仪很长一段时间，大大降低了仪器的使用效率。此外，进行一系列终点法读取会产生一个一个的单独数据，必须手动将它们连接在一起才能生成动力学曲线图。使用 Molecular Devices 公司的酶标仪和 SoftMax Pro 软件，研究人员现在可以使用软件的中断和继续读板功能进行长时间测量 (图 1) 。这些功能允许从仪器中移除微孔板进行培养基添加或其他实验，然后恢复动力学读数，同时将所有数据点保留在单个孔板中，以便于分析。

非连续动态读取方式

的细菌生长测量操作

这里向大家介绍如何使用非连续动态读取方式通过 600 nm 的吸光度进行 24 小时细菌生长测量。在时间零点启动了动力学读板。要中断动力学测量，在 SoftMax Pro 软件的“控制与状态”区域点击“中断”按钮。仪器在暂停前完成了所选读取区域中剩余孔的读取。然后将板从酶标仪中取出。对于动力学读取的下一个时间点，将孔板放入酶标仪。打开原始数据文件，点击继续 (Append) 按钮以恢复动力学读取并添加更多数据点 (表 1) 。

细菌生长曲线

的数据整合与参数分析

继续 (Append) 功能将不连续的测量结果连接成一个连续的细菌生长曲线。在 SoftMax Pro 软件中计算细菌生长曲线的开始时间，比较细菌生长条件。设置数据归一化，计算细菌培养达到 0.6 OD 值所需的起始时间，并计算细菌生长曲线拐点处的斜率 (表 2) 。

细菌培养会经历四个阶段：延滞期、对数期、稳定期和衰退期 (图 2) 。本实验采集了足够多的数据点，以生成三种不同细菌培养物的细菌生长曲线 (图 3) 。数据显示，每种培养物在不同时间依次经历延滞期、对数期和稳定期。图中未观察到衰退期，因为仪器所采用的光散射法测量的是样本的质量而非单个细胞。死亡细胞仍占据样本的质量，并对光散射产生影响，从而影响 OD 600 值。

利用 SoftMax Pro 软件可以计算细胞生长的各种参数。通过计算细菌培养物达到特定光密度时的时间，可以对生长速率进行定量比较。在本实验中，可以观察到在 10 倍稀释的培养物中所需时间最短 (表 2) 。

细菌生长曲线

在抗菌化合物筛选中的应用

数据分析及结果展示

通过运算设置界面可以进行高级动态学数据分析。图 5 展示了细菌生长实验的运算方法设置。菜单被分为两个部分：原始数据和数据运算步骤。

原始数据跟踪与转换 (标准化) 数据跟踪的比较视图如图6所示。

当然，也可以将原始数据进行对数转换，并计算出最大生长速率，如图 7。

为了让用户能够以表格形式直观地比较不同的生长条件 (以数值形式呈现) ，模板编辑工具允许将板布局与样本组进行关联，然后将运算后的数据 (最大增长率) 以表格形式展示出来，如图 8 (上图) 所示。通过后续的计算步骤，可以得到生长速率 (k) 和倍增时间 (g) 。为了更好地进行数据可视化，结果可以以柱状图的形式展示 (图 8，下图) ，以便更轻松地评估生长条件或处理效果。

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