?KTA pure micro专为小规模样品纯化、微量样品检测而打造，适用于蛋白、多肽、核酸等分子的分析检测，广泛用于生物制药、生命科学研究等领域。
为了帮助大家解决对微量纯化的需求，今天带大家一起了解?KTA pure micro在科研和工业的两个应用案例。
案例一：?KTA pure micro在单抗质控中的应用
挑战
在药物开发过程中，单抗易发生聚集，使产品的稳定性下降、不利于产品的存储，更甚者药物作用于人体将会引发不良反应而造成患者安全风险。
解决方案
生产过程中监测产品聚集水平，科学家通过优化生产策略有效降低聚集体含量。
凝胶过滤层析/分子筛（SEC）根据样品大小和形状对聚集体进行分离和检测，可用于量化和表征单抗聚集的情况。
单抗药物的另一个风险则是电荷异构体，也称电荷异质性。异构体可能由脱酰胺、氧化、糖化或C端赖氨酸剪切等翻译后修饰引起，会显著影响单抗的稳定性、药代动力学和免疫原性，因此需要对单抗进行全面表征。
离子交换层析（IEX）可以利用单抗电荷异构体之间的净电荷差异进行分离和定量。这些信息对于确保批次间的一致性和优化配方策略至关重要。
CHO细胞表达的单抗纯化方案：产品先通过MabSelect PrismA捕获，Capto S ImpAct离子交换填料进行精细纯化，每一步纯化后均进行层析分析用于组分合并和关键质量属性（CQA）分析。
实验设备、耗材与方法
抗体分子表达后经亲和纯化，收集组分通过分析型SEC评估聚集情况；亲和纯化的单抗再经离子交换层析纯化，收集组分通过分析型IEX测定聚集体含量和电荷异构体。
分析SEC层析：
使用?KTA pure micro系统和ALIAS自动进样器搭配Superdex 200 Increase 3.2/300层析柱进行聚集体分析；
分析IEX层析：
使用?KTA pure micro系统和ALIAS自动进样器搭配Capto HiRes S 5/50层析柱进行电荷异构体分析；
图1：实验流程和实验方法
实验结果
结合两步分析型SEC的检测结果，最终合并了115-125 mL之间的组分储存备用。结果显示经长期储存，可溶性单体单抗仍然是合并样品中的主要成分，聚集体、片段和电荷电荷异构体的含量较低。
案例小结：
本案例展示了使用?KTA pure micro系统结合ALIAS生物自动进样器评估单抗关键质量属性（CQA）的应用：
通过亲和色谱和离子交换层析纯化单抗，?KTA pure micro系统搭配自动进样器和Superdex 200 Increase 3.2/300、Capto HiRes S 5/50层析柱分别可以进行聚集体和电荷异构体的分析。
这些信息可以指导用户优化纯化策略，以获得聚集体、片段和电荷异构体含量较低的纯样品。同时分析SEC还可用于在储存后快速检查蛋白质样品的状态。
案例二：?KTA pure micro在Cryo-EM解析结构中的应用
挑战
冷冻电镜可以帮助科学家解析来自昆虫、哺乳动物重组甚至天然表达系统的产生的微量蛋白复合物的结构。这些复合物通常非常不稳定，这使得纯化过程具有挑战性。
结构解析时，研究人员需要将最终样品以约4 μL的小滴形式（浓度0.1 - 5.0 mg/mL）加到电镜网格中。
解决方案
为了避免样品在终末层析纯化步骤后发生聚集，应当尽量避免额外的浓缩步骤，因此选择小规模制备柱（如 Superdex Increase 3.2/300）和微量层析系统（?KTA pure micro）进行微量样品的纯化。
实验设备、耗材与方法
测试案例：
DNA结合蛋白复合物的体外重构；
层析系统：
?KTA pure micro与经典?KTA micro系统；
层析柱：
Superdex 200 Increase 3.2/300层析柱，使用30 μL进样环进样；
实验结果
将蛋白质I（180 kDa）、蛋白质II（32 kDa）和DNA在体外进行重构。结果显示主要吸收峰的保留体积基本相似，仅有一点细微差别。
两款?KTA系统都出色地将目标复合物（峰A2）与蛋白质杂质（峰B）和过量DNA（峰C）分离。目标复合物倾向于形成同源二聚体（峰A1）。单体与二聚体形成的动态平衡解释了峰A1高度的差异。目标组分（虚线框，峰A1）的电镜网格制备在显微照片上显示出均匀的样品分布和详细的2D类别。
微量层析系统?KTA pure micro具有极小的内部体积，从UV检测器到组分收集器的延迟体积仅为18 μL，系统标配微量体积的阀门、微量体积检测器和极细连接管道，它拥有适合微量样品纯化的硬件参数和极佳实验表现。
与标准系统体积的?KTA相比，可显著提高实验的分辨率，如果您对微量纯化/检测有需求，欢迎跟当地的销售代表或技术支持取得联系！
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