血管内支架薄截面显微试样的制备

引言

冠状支架是一些金属支架，可以在已经闭合或是看起来很可能要闭合的动脉中与一个气囊导管一道扩展。冠状支架通过支撑开启动脉恢复足够的血液流动到心肌。

冠状支架的发明人是Charles Dotter，他在1969年研制出他的DY个支架。Charles Dotter 继续改进和发展他的设计并在1983年与Andrew Craig一道发明了一种可以扩展的支架，这是用一种镍钛合金制造的，目前这种材料经常用来制作支架。

随着支架的使用越来越成为平常的事情，对于人体和支架的交互作用有较好的理解始终是一个重要的临床议题。对于不同的支架设计、材料、表面涂层、以及附属的药物处理的研究要求对于装有支架的血管进行详尽的组织学和免疫组织化学分析，特别是在支架原位的细胞组织与金属的界面处。

正确的制备技术将会增强对细胞组织对临床安装支架（特别是在细胞组织与支架的界面处）的反应。此外，它还可以对扩展特性进行周密的评估。这种观察甚至能导致研制出经过改进的支架设计。

试样制备步骤

1. 切除安装有支架的动脉，用盐水冲洗并浸入盐水中固定两小时。

2. 取薄切片之前先将安装有支架的动脉进行镶嵌。选择一种收缩率Z小、并且在取薄切片的过程中不会使镶嵌材料发生软化。一种低粘度环氧树脂，例如EpoThin^®，是一个非常好的选择。使用时按照产品的说明量出树脂和硬化剂并将其均匀混合，操作时的动作应当和缓以避免产生过多的气泡。使用前，将混合物静置数分钟，以便使残留的空气上升至顶部而逸出。将试样放入模具内并将试样与环氧树脂进行真空浸透。ZH，浇入足够数量的环氧树脂，使其完全覆盖住试样。

3. 在用精密切割机进行切割前，先用600#（P1200）和120#（P2500）CarbiMet^® SiC砂纸，在MetaServ^® 2000型磨光/抛光机或类似的设备上将镶嵌好的试样端面磨光。

4. 用接触粘合剂将磨光表面粘接在承物玻璃片上。用 perspex (一种介电有机玻璃) 做的承物片对镶嵌截面可提供比普通承物玻璃片更大的粘合力。不过，用600#（P1200）CarbiMet^® SiC砂纸对普通承物玻璃片进行预磨光也能改善其粘合性能。

5. 选择一种能使切割损耗 (即由于切割片本身的厚度在切割过程中对试样材料产生的磨耗) Z小的切割片进行切割。备注：使用薄切割片时选用的法兰盘（切割片的支撑）应当能提供ZD的支撑，以避免切割时发生弯曲或扭动。粘接了立方氮化硼的 IsoCut^® 型薄切割片能够在每15 mm 的支架上能再现地切割出28至30个截面。

安装了支架的动脉薄截面显微组织，示出了细胞组织与支架的界面

6. 将经过镶嵌的试样装在 IsoMet^® 型精密切割机的夹钳上。将显微测微计进行校准，从试样承物玻璃片一端截取50 至100 μm 厚的截面。

7. 重复步骤3和4，制备下一个截面的表面。重复这一过程并将陆续得到的截面分别粘接在承物玻璃片上。

8. 用一系列的CarbiMet^® SiC砂纸将每个截面磨光至厚度为10–20 μm。固定在砂纸纸基上的SiC磨料颗粒不至于嵌入试样中的细胞组织部分。磨光先从320# (P400) 砂纸开始，接着使用360# (P500)、400# (P800)、600# (P1200)、1200# (P2500) 砂纸。磨光时要仔细，避免使材料去除过快和不均匀。在转入下一道砂纸以前要检查是否已经获得均匀的划痕。

9. 用3 μm 的 UltraPrep™ A 型金刚石研磨薄膜进行抛光，然后就可以进行显微观察。

自动化制备设备/特殊夹具

如果打算用手工方法对薄截面试样进行磨光和抛光，操作者应具有相当丰富的经验，所需的时间也较长。用手工方法磨薄截面试样也容易将试样磨偏，使截面一侧的厚度小于另一侧。

表面和厚度不均匀的截面试样不能为组织化学分析提供ZJ的条件。为了制备用于组织学和免疫组织化学染色的试样，试样应当磨光至5 μm 并且厚度均匀。

为了将以上提到的问题减至Z小，当试样需要用手工方法制备时，可以使用具有固定的止动装置夹持器。例如，组织学精密磨光夹具 (产品编号60-8087) 具有用碳化物做的止动装置，可以避免使试样磨光过度并使试样获得均匀的所需厚度。夹具适用的承物玻璃片尺寸为27 x 46mm。

便携式BioThin™型薄截面切割装置(产品编号38- 2100)用来切割厚度为5 μm的截面已经获得了巨大的成功。这个全封闭系统使用滚珠轴承来控制所施加力的大小和承物片的定位。对于染色前的ZZ减薄，建议使用磨料尺寸为 3 μm 的 UltraPrep™ A 型金刚石研磨薄膜。

大多数半自动磨光/抛光机再加上岩相学和组织学用的薄截面承物片夹持器 (产品编号69 -1584) 并使用单独加载方式，就可以使磨光过程自动化。使用双面胶带将包含薄截面试样的承物片粘接在承物片夹持器上。然后将一个个承物片夹持器放入单独加载承物片夹持器中。对每块试样施加的载荷为 3 至 5 磅/平方英寸，取决于所需的材料去除速率。至少每隔2分钟对试样的制备效果进行评估直到ZJ制备步骤确立为止。

参考文献

M Bellis, “Coronary Stents” Inventors – Cardiac Pacemaker/Electrocardiology.http://inventors. about.com/library/inventors/blcardiac.htm (last viewed Oct 15, 2004).

M. Malik, J Gunn, CM Holt, L Shepherd, SE Francis, CMH Newman, DC Crossman, DC Cumberland, “Intravascular stents: a new technique for tissue processing for histology, immunohistochemistry, and transmission electron microscopy” Heart 1998; 80:509-516.