我们前序两篇通讯分享的欧洲药典中应用的薄层色谱图像半定量技术,其实就是”图像峰形分析“ (Peak Profile from Image, PPI) 。
前文回顾:
1. HPTLC图像定量技术大事记
2. 欧洲药典认可图像半定量HPTLC技术助力中药质控
通常我们习惯使用的薄层色谱扫描仪是通过每次扫描使用单一波长测量斑点的吸光度或荧光强度。与扫描仪的测量法不同,图像分析则是评估红 (R)、绿 (G) 和蓝 (B) 三通道的像素值。对于每个轨道,取规定区域内的 50% 核心处的像素线(Rf 位置)的 RGB 值进行计算,利用公式 L = (1/3 R) + (1/3 G) + (1/3 B) 得出亮度值 L。将亮度值作为 Rf 的函数绘制出来,就能生成图像峰形分析曲线。对 PPI 数据进行积分处理得到的峰高和峰面积信息可用于定量评估。原理可见图1:
图 1:将 HPTLC 色谱图的数字图像转换为相应的图像峰形分析曲线(PPI)
CAMAG 专业软件色谱工作站可以针对薄层色谱图像进行一键转换,内置自动生成PPI数据功能,可直接在薄层色谱图像的基础上直接进行半定量和定量计算。如果您对此功能感兴趣,欢迎联系我们进行免费试用。
参考文献:
S. Ca?igueral et al. Chapter 7: High performance thin-layer chromatography (HPTLC) in the quality control of herbal products. pp 119 – 136. In: Recent Advances in Pharmaceutical Sciences VIII. 2018.
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