揭示隐藏信号：光谱流式细胞术如何克服自发荧光的干扰

自发荧光（AF）干扰给流式细胞术的检测带来巨大的困扰，使荧光信号的检测、定量和解释更加复杂。同时，异质性的自发荧光在不同细胞类型和成分之间变化，使结果分析复杂性增加。

虽然AF有助于评估细胞状态，但其光谱干扰（尤其在400-600 nm区间）会掩盖弱信号标记物（如FITC/Alexa Fluor 488），导致：

如图1所示，在未染色的植物提取物中检测到升高的自发荧光（AF）水平，提示后续实验分析可能存在潜在的复杂性。实验程序和染色技术，如醛固定和营养物质的供应，也会影响细胞的自发荧光水平，从而增加细胞分析中自发荧光的复杂性和变异性。

光谱流式细胞术通过捕捉每种荧光分子在广泛波长范围内的整个发射光谱，为其生成唯一的光谱特征，随后用于特定光谱解混和识别。然而，光谱流式通过全光谱捕获实现多色解混，但AF仍带来三大挑战（图2）：

如何应对这些挑战和难题，需要全面了解样本、精心设计实验、严格的去混合技术以及适当的对照，以提高数据的准确性和可靠性。同时，使用多个通道区分自发荧光信号和特定的荧光染料至关重要，因此我们需要一台功能更全面的科研利器的助力。

近期上市的??CytoFLEX mosaic光谱流式分析仪可提供10个未染色通道，可从中提取不同群体的自发荧光特征，提升弱信号的检测能力，帮助发现低丰度亚群。

下图显示了在CytoFLEX mosaic光谱流式分析仪上评估了AF提取对白细胞群体谱解混的影响，并评估了使用多个AF特征是否进一步改善了解混。

针对不同细胞群体（中性粒细胞、嗜酸粒细胞、单核细胞、淋巴细胞）表面标志物表达的直方图，在同一文件中考虑了0、1、2或4个自发荧光签名在解混矩阵中的影响。红色（No AF）表示没有进行自发荧光提取的数据，蓝色（1 AF）表示去除一个自发荧光签名后的数据，橙色（2 AF）表示去除两个自发荧光签名后的数据，绿色（4 AF）表示去除四个自发荧光签名后的数据。结果显示，通过优化AF校正，减少了嗜酸细胞、单核细胞和淋巴细胞中假阳性CD16的情况，同时保留了真实的生物信号。

CytoFLEX mosaic还提供了光谱拆分后的结果验证功能，实时评估解析准确性。当数据出现异常时，仪器能自动提示潜在问题通道，让研究人员轻松快速地排除数据隐患，保障实验结果的可靠性。最后，光谱分析软件CytExpert for Spectral，延续了CytExpert软件智能易操作的特点，非常容易学习和操作。