特色方案｜19 种氨基酸分析（AQC 柱前衍生法）

1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-20AD 高效液相色谱仪；

色谱柱：Shim-pack Scepter C18-120（5 μm，4.6×250 mm；P/N：227-31020-06） ；

纯水机：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L 水箱 + 取水器） ；

SHIMSEN Disc HPPTFE 针式过滤器（P/N：380-00341） ；

LC/MS 认证样品瓶 LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

Nichipet Air 移液枪：Nichipet Air 0.5-10 μL（P/N：00-NAR-10）；

Nichipet Air 10-100 μL（ P/N：00-NAR-100） ；

Nichipet Air 100-1000 μL（P/N：00-NAR-1000） ；

Nichipet Air 1000-10000 μL（P/N：00-NAR-10000）

1.2 混合对照品溶液的配制

分别精密称取 19 种氨基酸和γ-氨基丁酸（内标）适量，加水或盐酸水溶液（天冬氨酸、胱氨酸、酪氨酸）溶解并稀释至 1 mg/mL，得到各单标母液；分别精密吸取各单标母液 100μL 于 1.5mL 离心管中，精密加入 700μL 硼酸盐溶液（ 0.4mol/L：取硼酸 12.36g，加水 400 mL 溶解，用 40%氢氧化钠溶液调 pH 至 8.8，加水稀释至 500mL）和 200μL 的 AQC 溶液（称取 AQC 适量，加乙腈适量，55°C 加热 10min，并超声使溶解后用乙腈稀释至 1.6mg/mL），涡旋混匀，盖盖密封，55°C 加热 10min，放冷，得到衍生后的各单标溶液；分别各取衍生的单标溶液 50μL，混匀，备用。（ 注意：半胱氨酸易降解，需要现用现配现衍生）

本文建立了 19 种氨基酸 AQC 柱前衍生的 HPLC 分析方法。参照 《中国药典》四部中的色谱条件并进行优化，采用色谱柱 Shim-pack Scepter C18-120 分析经 AQC 衍生后的 19 种氨基酸，结果显示，目标物峰型对称， 分离度均大于 1.5，且重复性良好，满足标准要求。此方法可为 19 种蛋白氨基酸的检测提供参考。