利用先进的成像技术提高
斑马鱼胚胎分析的清晰度和速度
本文介绍了带有THUNDER功能的 DM6 B 显微镜如何简化转基因斑马鱼胚胎的筛选，解决传统显微镜分辨率低和焦外模糊的常见问题。高速成像、增强的对比度以及对低蛋白表达成像的灵敏度，确保了准确高效的筛选。其主要功能包括即时计算清除、高灵敏度摄像头和定向照明，是发育生物学的理想之选。
筛选转基因斑马鱼胚胎
转基因斑马鱼胚胎是发育生物学中常用的模式生物 [1]。这些样本通常被设计用于体内容积成像，使用需要特定样本制备的系统，包括光片显微镜 [2]。因此，需要一种快速准确的筛选技术来确定斑马鱼下游光片显微镜成像是否存在适当的蛋白质表达。
斑马鱼筛选通常使用具有荧光成像功能的体视显微镜进行。然而，体视显微镜的局限性在于分辨率和灵敏度较低，这在表达量较低的样本中尤为重要。传统的宽场显微镜是一种高速成像技术，但也存在焦外模糊的问题，尤其是对于包括斑马鱼胚胎在内的较厚样本。这种失焦模糊降低了对比度，而对比度对于斑马鱼的表达可视化至关重要。
配备 THUNDER 的 DM6 B 显微镜是一种用户友好型系统，可通过它进行高速筛选：
采用新型SynapseTM 系统实现高速触发；
采用 8 通道 LED 光源，提供柔和而有针对性的照明；
利用高灵敏度 K8 相机检测低表达蛋白；
通过 LAS X Navigator 螺旋扫描快速概览扫描，找到最佳转基因斑马鱼；
THUNDER ICC（实时即时图像增强功能）可提高对比度，清晰显示荧光蛋白。
图 1：THUNDER Imager Tissue 用于筛选转基因斑马鱼。
图像由澳大利亚莫纳什大学（Monash University）莫纳什生物医学发现研究所博士生 Laura Kreplin 提供。
材料和方法
在此工作流程中，转基因斑马鱼被转移到 35 毫米的培养皿中。不过，也有与THUNDER成像系统组织兼容的其他安装平台。
使用低倍物镜定位培养皿中的斑马鱼胚胎（图 2）。
LAS-X Navigator用于标记斑马鱼感兴趣的区域（图 3）。
使用分辨率更高的物镜来确定表达量是否足以进行下游成像。此类物镜包括 HC FLUOTAR L 16x/0,60 IMM CORR VISIR (506533)、HC APO L 63x/0,90 W U-V-I (506148) 和 HC FLUOTAR L 25x/0,95 W VISIR (506374)。低 LED 光强度、K8 Scientific CMOS 摄像机 95% 的峰值 QE 和实时触发相结合，确保在筛选过程中保留内源水平的蛋白质信号（图 4）。
图 2：使用 THUNDER Imager Tissue 上的 1.25x/0.04 干式物镜拍摄的斑马鱼胚胎明场图像。比例尺为 1500 μm。
图像由澳大利亚墨尔本莫纳什大学（Monash University）莫纳什生物医学发现研究所 Dr. Senthil Arumugam 和博士生 Laura Kreplin 提供。
图 3：使用 LAS X Navigator 发现的斑马鱼胚胎，并标记用于荧光筛选。
图像由澳大利亚墨尔本莫纳什大学（Monash University）莫纳什生物医学发现研究所 Dr. Senthil Arumugam 和博士生 Laura Kreplin 提供。
图 4：
A) 使用 16x/0.6 浸没式下浸物镜的 THUNDER Imager Tissue 配置。
B) 采用 THUNDER 实时即时计算清除成像（live instant computational clearing）获得的斑马鱼胚胎图像。成像 mKate 表达时，使用 LED 8 的 555 nm 激发线，在 2% 激发强度和 150 ms 曝光时间下获取图像。比例尺为 300 μm。
图像由澳大利亚墨尔本莫纳什大学（Monash University）莫纳什生物医学发现研究所 Dr. Senthil Arumugam 和博士生 Laura Kreplin 提供。
结论
请输入
选择具有适当转基因能力的斑马鱼胚胎进行下游实验，包括光片成像。DM6 B 配备了THUNDER技术，具有高速成像能力，而且对比度和灵敏度都有所提高，可用于成像低表达蛋白，有助于确保筛查结果的准确性和高效性。这项研究表明，DM6 B 和THUNDER技术可以帮助人们更好地理解发育生物学和其他相关领域的现象。
参考文献：
1. Veldman, M. B.; Lin, S. 《斑马鱼作为儿科研究的发育模式生物》。儿科研究》，2008 年，64（5），470-476 页。
2. Oates, A. C.; Naganathan, S. R. 从斑马鱼胚胎制备单节段外植体。JoVE 2022，第184期，e63196。
3. YouTube 采访莫纳什生物医学发现研究所：研究生命系统& 利用显微镜观察动态过程
相关产品
徕卡DM6 B 正置显微镜
徕卡显微咨询电话：400-630-7761
徕卡显微公司地址：
徕卡显微系统(上海)贸易有限公司
上海市长宁区福泉北路518号，2号楼5楼
上海， 200335 China
徕卡显微系统北京办事处
北京市朝阳区东三环北路27号楼嘉铭中心A座19楼
徕卡仪器有限公司北京办事处， CN-100044 China
徕卡显微系统广州办事处
广州国际生物岛星岛环北路1号B2栋501、502单元
徕卡仪器有限公司广州办事处， CN-510075 China
徕卡显微系统成都办事处
成都市锦江区东御街18号 百扬大厦1709室，CN-610063 China
徕卡显微系统西安分公司
陕西省西安市雁塔区南二环西段64号凯德广场写字楼8楼09室，710065 China
关于徕卡显微系统
全部评论(0条)
相关产品推荐（★较多用户关注☆）
徕卡冷冻断裂系统 Leica EM ACE900
报价：面议 已咨询 2727次
徕卡真空冷冻传输系统 Leica EM VCT500
报价：面议 已咨询 3247次
徕卡高压冷冻仪 Leica EM ICE
报价：面议 已咨询 2848次
徕卡冷冻光电联用 Leica EM Cryo CLEM
报价：面议 已咨询 3566次
徕卡高分辨率共聚焦显微镜 Leica TCS SPE
报价：面议 已咨询 2974次
德国徕卡 激光显微切割 LMD7
报价：面议 已咨询 4978次
徕卡国产 正置智能型显微镜 DM6 FS
报价：面议 已咨询 2421次
徕卡国产 生命科学正置显微镜 Leica DM6 B
报价：面议 已咨询 2632次
你可能还想看
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布，观点仅代表作者本人，不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益，请及时告诉,我们立即通知作者，并马上删除。
②凡本网注明"来源：仪器网"的所有作品，版权均属于仪器网，转载时须经本网同意，并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品来源，并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益，请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱：hezou_yiqi
热点文章
近期话题
相关产品
在线留言
沪公网安备 31011502008050号
参与评论
登录后参与评论