寨卡病毒 (ZIKV) 属于黄病毒科,早期 ZIKV 免疫是预防小脑畸形和吉兰-巴利综合征(GBS) 等并发症的首要任务。 与传统的疫苗接种方法不同,口腔溶解膜(ODF)或粘膜粘附膜技术是一个新兴的、令人兴奋的概念,可用于药物领域的疫苗设计和制剂开发。 这种有吸引力且新颖的方法可以帮助因疾病或综合征而患有吞咽困难的患者。 在这项研究中,我们研究了一种微粒寨卡疫苗,通过口腔途径在薄膜或口腔溶解膜 (ODF) 的帮助下给药,其中一次初剂量和两次加强剂量相隔两周。 在体外,ODF表现出优异的理化性质,表明该薄膜是疫苗微粒的良好载体,并且与颊粘膜具有生物相容性。 体内结果显示,针对 ZIKV 特异性免疫具有强大的体液(IgG、IgG1 和 IgG2a 亚型)和 T 细胞反应(CD4+/CD8+)。 Zika MP 疫苗和佐剂 Zika MP 疫苗都会影响记忆(CD45R/CD27)和细胞内细胞因子(TNF-α 和 IL-6)的表达。 在这项研究中,借助 ODF 通过口腔途径进行ZIKV 疫苗接种,证明了开发无痛传染病疫苗的巨大前景。
引言
由于粘膜相关淋巴组织(MALT)位于口腔,因此颊部给药途径是一种非常有吸引力的疫苗注射方法,可刺激粘膜免疫。虽然口服、鼻腔和肺部疫苗递送方法已被广泛讨论,但鲜为人知的舌下和口腔途径受到的关注相对较少。粘膜组织由于其广阔的表面积和免疫能力,为疫苗接种和靶向提供了有吸引力的选择。颊粘膜富含抗原呈递细胞,提供了一种对患者友好、无痛的替代方案,可能会提高疫苗接种率。一旦 ODF 被放置在颊粘膜中,称为朗格汉斯细胞和 M 细胞样细胞的 APC 就可以吸收寨卡疫苗 MP(图 1)。
利用全自动 3D 打印工艺进行 ODF 制造,我们经济高效的方法消除了手工劳动,确保了可重复性。这种创新方法有望提高疫苗的可及性、降低成本并简化疫苗接种过程。3D 打印口腔溶解膜 (ODF) 的制备
ODF 的配方涉及使用各种可生物降解的聚合物。首先,使用乙醇作为溶剂制备Kollidon 90F (16.24% w/v) 和Kollidon VA64 (1.06% w/v)。接下来,制备 PEG 2000 (0.6% w/v) 并缓慢添加到先前的混合物中。将该混合物用箔覆盖并搅拌4小时。将所得混合物与疫苗微粒一起加载到 CELLINK BIO X3D 生物打印机(的喷嘴头上。 G 代码是为打印 ODF 而创建的。 ODF 配方是在实验室准备的模具中打印的。该模具是使用适用于两种聚合物的 SYLGARD 186 有机硅弹性体套件制备的,并将所得混合物置于 96 孔板的盖子上以制作模具。将所得混合物与灭活的寨卡病毒微粒一起装入设定为室温 (RT) 和 50 kPa(压力)的 3D 打印机中。 3D打印机完成后,将96孔板放入4℃加热室中5分钟,然后放入干燥器中过夜。
口腔溶解膜 (ODF) 口腔免疫的体内研究设计
所有动物实验均获得美世大学机构动物护理和使用委员会 (IACUC) 协议 (#A2303001) 的批准。 SwissWebster (SW) 小鼠,4-6 周龄,获自 Charles River Laboratories(美国马萨诸塞州威尔明顿)。如图 2 所示,小鼠被随机分配,并使用口腔溶解膜 (ODF) 通过口腔给药接受初始剂量和两次加强剂量。每两周收集一次血清,通过酶联免疫吸附测定 (ELISA) 测定总 IgG、IgA 和 IgG 亚型(IgG2a、IgG1 和 IgG3)的抗体反应。攻击后,收获免疫器官(脾、腹股沟和腋窝淋巴结)并随后进行流式细胞术(FACS)分析。
结果
总结
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