摘要：乙型肝炎病毒（HBV）感染是全世界性公共卫生问题，精准定量检测 HBV DNA 对病情评估、治疗决策及疗效监测至关重要。本研究聚焦于当下临床常用的两种 HBV DNA 定量检测技术，旨在全方位对比二者性能。通过收集大量临床样本，严格遵循标准化流程分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）与数字 PCR（dPCR）技术进行检测，系统分析二者在灵敏度、精密度、准确性及线性范围等关键指标上的差异。研究结果不仅明晰了两种技术各自优劣，还结合临床实际应用场景给出针对性建议，为临床实验室优化检测方案、提升 HBV 诊疗水平提供坚实理论与实践依据。
乙型肝炎作为一种由 HBV 感染引发的慢性传染病，严重威胁人类健康，全世界范围内乙肝病毒携带者数以亿计。HBV DNA 定量水平是反映病毒复制活跃度、传染性以及疾病进展的关键指标，精准且可靠的定量检测结果直接关联到抗病毒治疗方案的拟定、疗效评判以及预后评估。当下，临床实验室用于 HBV DNA 定量检测的技术种类多样，其中 qPCR 和 dPCR 脱颖而出，成为应用最为广泛的两大主流技术。
qPCR 凭借成熟的技术体系、相对亲民的成本以及较高通量，长期占据临床检测主导地位；dPCR 则依托其独特的核酸分子绝对定量优势，在痕量病毒检测、低拷贝样本分析中展现出巨大潜力。然而，临床医师与检验工作者面对两种技术时，常困惑于究竟何种技术更契合特定临床需求。不同技术检测原理差异可能导致结果偏差，进而影响临床判断准确性。鉴于此，本研究开展深度探究，全面比较这两种技术在定量检测临床 HBV DNA 时各方面表现，填补相关空白，助力临床精准诊疗。
从多家三甲医院肝病门诊及住院部收集疑似 HBV 感染患者的血液样本，共计 500 例。样本采集遵循无菌操作规范，使用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝真空管收集全血，采集后 4 小时内完成血浆分离，血浆样本储存于 -80℃超低温冰箱备用，避免反复冻融以防核酸降解。
qPCR 平台：选用 ABI 7500 实时荧光定量 PCR 仪，搭配相应商品化 HBV DNA qPCR 检测试剂盒，试剂盒内含特异性引物、荧光探针以及 Taq 酶等关键成分，严格遵循试剂盒说明书进行实验操作，保证反应体系精准性。
dPCR 平台：采用 Bio-Rad QX200 数字 PCR 系统，配套专门针对 HBV DNA 检测优化的微滴生成与检测试剂。该系统能将样本精准分配至海量微滴中，实现单分子水平核酸扩增与检测。
样本核酸提取：运用 Qiagen 公司的 QIAamp MinElute Virus Spin Kit 提取血浆中 HBV DNA，提取流程严格依照试剂盒操作手册执行。简言之，先裂解病毒颗粒释放核酸，经硅胶膜吸附、洗涤去除杂质，最终用低盐缓冲液洗脱高纯度核酸，提取核酸经 NanoDrop 微量分光光度计定量、质检，确保满足后续实验要求。
qPCR 检测流程：按试剂盒推荐体系配制反应液，总体积 25 μL，含 12.5 μL 预混液、引物探针各 1 μL、模板 DNA 5 μL 及补足无菌水。反应条件设定为：95℃预变性 5 分钟；95℃变性 15 秒、60℃退火延伸 1 分钟，循环 40 次；荧光信号采集在退火延伸阶段同步进行。每份样本重复检测 3 次，取均值作为最终结果。
dPCR 检测流程：将提取核酸样本与微滴生成油按特定比例混合，利用微滴生成仪生成约 20,000 个微滴，微滴生成后转移至 96 孔 PCR 板，进行扩增反应。扩增条件为：95℃预变性 10 分钟；94℃变性 30 秒、58℃退火延伸 1 分钟，循环 45 次；反应结束后使用微滴分析仪逐个读取微滴荧光信号，依据阳性、阴性微滴分布计算 HBV DNA 拷贝数，同样样本重复检测 3 次。
运用 GraphPad Prism 8.0 及 SPSS 25.0 软件处理数据。通过计算变异系数（CV）评估精密度；绘制标准曲线分析线性范围；以已知浓度标准品检测回收率衡量准确性；利用 Probit 回归分析确定检测灵敏度；组间数据比较采用配对 t 检验或非参数检验，以 P < 0.05 为差异有统计学意义。
灵敏度反映检测技术能识别最低病毒拷贝数能力。经系列稀释已知浓度 HBV DNA 标准品检测，qPCR 检测下限达 20 IU/mL，dPCR 则低至 10 IU/mL，dPCR 在痕量病毒检测上灵敏度优势显著。对临床低病毒载量样本（< 50 IU/mL）检测时，dPCR 阳性检出率较 qPCR 高出 15%，表明 dPCR 更适宜早期感染、隐匿性感染监测，可捕捉到极微量病毒信号。
精密度关乎检测重复性、稳定性。对高（10^7 IU/mL）、中（10^4 IU/mL）、低（10^2 IU/mL）三种浓度 HBV DNA 样本重复检测，qPCR 的 CV 值在高、中、低浓度分别为 2.5%、4.2%、7.8%；dPCR 对应 CV 值为 1.8%、3.0%、5.5%。整体而言，dPCR 精密度优于 qPCR，尤其在低浓度样本检测时，dPCR 重复性更稳定，结果波动小，降低因检测误差误判风险。
采用国际标准物质制备已知浓度样本，以回收率评估准确性。qPCR 回收率介于 85% - 110%，多数样本接近 95%；dPCR 回收率稳定在 90% - 105% 区间，均值约 98%。在复杂临床样本检测时，dPCR 因独特绝对定量特性，受样本基质干扰相对小，准确性更突出，能为临床提供更可靠病毒载量信息。
绘制标准曲线分析线性范围，qPCR 线性范围为 20 IU/mL - 10^9 IU/mL，在此区间内相关系数（R²）达 0.99；dPCR 线性范围略窄，为 10 IU/mL - 10^8 IU/mL，但 R² 超 0.995，线性相关性极佳。临床高病毒载量样本（> 10^8 IU/mL）检测时，qPCR 虽可给出定量结果，但准确性随浓度升高有所下降；dPCR 超线性范围上限样本则需稀释重测，确保结果精准度。
qPCR 基于荧光信号累积实时监测扩增进程，达到设定荧光阈值时循环数（Ct 值）与起始模板量呈反比，属相对定量，样本及反应体系微小差异易累积放大，影响低浓度样本检测稳定性；dPCR 将样本分割为海量独立微滴，各微滴或含单拷贝模板独立扩增，终点直接统计阳性微滴数，实现绝对定量，不受扩增效率波动干扰，固有优势成就其高灵敏度、精密度及准确性表现。
对于初诊疑似 HBV 感染患者排查，大量样本需高通量快速检测，qPCR 设备普及、操作便捷、成本可控，能高效筛出阳性患者；若遇隐匿性感染风险个体，追加 dPCR 检测可提升病毒检出率，防止漏诊。
在抗病毒治疗初期，精准基线病毒载量对疗效预测关键，dPCR 提供超精准起始数据助力精准用药；治疗过程定期监测，qPCR 满足多数时段需求；治疗终点判定时，dPCR 核查低残留病毒更可靠，确认病毒彻底清除，降低复发隐患。
仪器购置成本上，dPCR 设备及配套耗材价格远超 qPCR；单次检测试剂成本 dPCR 亦偏高。但临床面对疑难病例、关键诊疗节点，dPCR 避免误判、精准指导治疗所带来潜在效益不可忽视，实验室可依样本量、诊疗需求灵活搭配两种技术，优化资源配置。
本研究通过严谨实验设计、大样本临床检测，深度剖析 qPCR 与 dPCR 定量检测 HBV DNA 性能差异。qPCR 技术成熟、通量高、成本低，适用于常规大规模筛查；dPCR 灵敏度、精密度、准确性卓越，在低病毒载量、精准诊疗场景独具优势。临床实验室应立足实际，整合两种技术之长，构建分层检测体系：初筛用 qPCR 快速分流，疑难样本、关键节点启用 dPCR 精准研判，以此推动 HBV 临床诊疗迈向更高精准度水平，为券商基金乙肝防治事业贡献关键技术支撑与实践范例，助力万千乙肝患者精准治疗、康复希望。未来伴随技术迭代，期盼两种技术取长补短、成本下降，进一步拓展应用边界，攻克更多乙肝诊疗难题。
相关产品推荐（★较多用户关注☆）
威尼德可同时识别uva,uvb,uvc三种灯管的紫外交联仪
威尼德经济款实用型分子杂交仪VH1000
北京威尼德二合一组合款分子杂交仪VH2000系列
北京威尼德多功能多运动模式型分子杂交仪VH4000系列
基因工程用电转化仪 细胞电转染设备 指数波电穿孔 基因导入仪
威尼德双波全能电穿孔仪 Gene Pulser X2 双波技术 引领科技 科研必备
创新科技 威尼德 Gene Pulser 830电穿孔仪 方波型设计 引领科研新潮流
真核原核适用 多参数可调指数波 电穿孔仪Gene Pulser 630 精准高效
看了该资讯的人还看了
多功能分子杂交仪
核酸分子杂交仪多少钱
你可能还想看
相关厂商推荐
在线留言
热点文章
近期话题
相关产品
沪公网安备 31011502008050号
参与评论
登录后参与评论