仪器网(yiqi.com)欢迎您!

| 注册2 登录
网站首页-资讯-专题- 微头条-话题-产品- 品牌库-搜索-供应商- 展会-招标-采购- 社区-知识-技术-资料库-方案-产品库- 视频

技术中心

当前位置:仪器网>技术中心> 科技文献> 正文

GFP质粒电转染SGC7901/ADM细胞的研究

来源:威尼德生物科技(北京)有限公司 更新时间:2024-10-22 17:42:58 阅读量:58
导读:绿色荧光蛋白(GFP)质粒电转染人胃癌耐药细胞株 SGC7901/ADM 的可行性及优化转染条件。通过对电转染参数的调整和细胞培养条件的优化,提高了转染效率。
引言:


在当今的生命科学研究领域,对细胞的基因操作是揭示生命奥秘和开发新疗法的关键手段之一。其中,质粒转染技术作为一种常用的基因导入方法,在细胞生物学、分子生物学等领域发挥着重要作用。SGC7901/ADM 细胞是一种人胃癌耐药细胞株,对其进行基因操作有助于深入研究胃癌的耐药机制,为开发有效的治疗策略提供依据。


绿色荧光蛋白(GFP)作为一种广泛应用的报告基因,具有易于检测、无细胞毒性等优点。通过将 GFP 质粒转染到 SGC7901/ADM 细胞中,可以直观地观察转染效率和细胞的生物学行为。电转染是一种高效的质粒转染方法,通过施加电场使细胞膜产生瞬时通透性,从而使外源 DNA 进入细胞。然而,电转染的效果受到多种因素的影响,如电场强度、脉冲时间、细胞密度等。因此,优化电转染条件对于提高转染效率至关重要。


本研究以 GFP 质粒电转染 SGC7901/ADM 细胞为主题,旨在探索最佳的电转染参数和细胞培养条件,为深入研究胃癌耐药机制提供有力的技术支持。


一、材料与方法


(一)材料


  1. 细胞株:人胃癌耐药细胞株 SGC7901/ADM。

  2. 质粒:GFP 质粒。

  3. 试剂:电转染试剂、细胞培养基、胎牛血清、抗生素等。

  4. 仪器:电转染仪、细胞培养箱、倒置显微镜、流式细胞仪等。


(二)方法


  1. 细胞培养
    • 将 SGC7901/ADM 细胞接种于含 10% 胎牛血清和 1% 抗生素的细胞培养基中,在 37℃、5% CO₂的培养箱中培养。

    • 当细胞生长至对数生长期时,进行传代培养。

  2. 质粒制备
    • 提取 GFP 质粒,并用紫外分光光度计测定其浓度和纯度。

    • 将质粒稀释至适当浓度备用。

  3. 电转染
    • 取对数生长期的 SGC7901/ADM 细胞,用胰酶消化后离心收集。

    • 将细胞重悬于电转染缓冲液中,调整细胞密度至适当浓度。

    • 将 GFP 质粒与细胞悬液混合,加入电转染杯中。

    • 根据不同的电转染参数(电场强度、脉冲时间、脉冲次数等)进行电转染。

    • 电转染后,将细胞转移至培养皿中,加入适量的细胞培养基,在 37℃、5% CO₂的培养箱中培养。

  4. 转染效率检测
    • 在电转染后的不同时间点,用倒置显微镜观察细胞的荧光表达情况。

    • 采用流式细胞仪检测 GFP 阳性细胞的比例,以确定转染效率。


二、结果


(一)电转染参数对转染效率的影响


  1. 电场强度:随着电场强度的增加,转染效率先升高后降低。当电场强度为一定值时,转染效率达到最高。

  2. 脉冲时间:脉冲时间过长或过短都会降低转染效率。在适当的脉冲时间范围内,转染效率较高。

  3. 脉冲次数:增加脉冲次数可以提高转染效率,但过多的脉冲次数会对细胞造成损伤。


(二)细胞密度对转染效率的影响
细胞密度过高或过低都会影响转染效率。在适当的细胞密度范围内,转染效率较高。


(三)转染后细胞的生长和荧光表达情况
电转染后的细胞能够正常生长,并且在一定时间内能够稳定表达 GFP。通过倒置显微镜和流式细胞仪观察,发现转染效率较高的细胞群体中,GFP 荧光强度较强。


三、讨论


(一)电转染参数的优化
本研究通过对电转染参数的优化,提高了 GFP 质粒转染 SGC7901/ADM 细胞的效率。电场强度、脉冲时间和脉冲次数是影响电转染效果的重要因素。在实际操作中,需要根据不同的细胞类型和质粒大小,选择合适的电转染参数。此外,电转染缓冲液的成分和 pH 值也会对转染效率产生影响,需要进行优化。


(二)细胞密度的影响
细胞密度对电转染效率也有一定的影响。过高或过低的细胞密度都会降低转染效率。在进行电转染时,需要根据细胞的生长状态和实验需求,选择适当的细胞密度。


(三)转染后细胞的生长和荧光表达
电转染后的细胞能够正常生长,并且在一定时间内能够稳定表达 GFP。这表明电转染对细胞的毒性较小,不会影响细胞的正常生理功能。通过观察 GFP 荧光表达情况,可以直观地了解转染效率和细胞的生物学行为。


四、结论


本研究成功地将 GFP 质粒电转染到人胃癌耐药细胞株 SGC7901/ADM 中,并优化了电转染参数和细胞培养条件。实验结果表明,在适当的电转染参数和细胞密度下,GFP 质粒能够高效地转染 SGC7901/ADM 细胞,并且转染后的细胞能够稳定表达 GFP。本研究为深入研究胃癌耐药机制以及开发新的治疗策略提供了重要的实验基础。


参与评论

全部评论(0条)

相关产品推荐(★较多用户关注☆)
看了该资讯的人还看了
你可能还想看
  • 技术
  • 资讯
  • 百科
  • 应用
  • 电化学工作站的研究内容
    电化学测量系统简称为电化学工作站,为电化学研究和教学常用的测量设备。其主要包括单通道工作站和多通道工作站两大类,在生物技术、物质的定性定量分析等方面应用。
    2025-10-181141阅读 电化学工作站
  • 质粒DNA提取方法以及常见问题
    核酸提取仪核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来使得样本核酸提取工作自动完成的仪器。其在输血安全、法医学鉴定、疾病控制中心、临床疾病诊断等多种领域得到广泛地应用。下面就让小编为你介绍一下破裂解法。
    2025-10-221993阅读
  • 细胞环境成像系统的组成
    这种成像系统能够提供细胞在不同生物学条件下的动态过程、微环境变化以及与外部刺激的反应,是研究疾病发生机制、药物开发及细胞的重要工具。本文将探讨细胞环境成像系统的主要组成部分及其工作原理,帮助读者更好地理解这一技术的核心价值和应用前景。
    2025-10-1690阅读 细胞成像系统
  • 融合细胞的选择方法
    在自发或人工诱导下,两个细胞或原生质体融合,使得一个杂种细胞形成,即是细胞融合。细胞融合使得异核体形成、通过细胞有丝分裂异核体进行核融合、zui终使得单核的杂种细胞形成为细胞融合的基本过程。
    2025-10-203452阅读
  • 培养基分装仪细胞培养基的介绍
    由不同营养物质组合配制而成,为微生物、植物或动物(或组织)的生长繁殖提供营养的营养基质,被称为培养基。通常,碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等几大类物质都属于培养基的成分。
    2025-10-211361阅读 培养基分装仪
  • 查看更多
相关厂商推荐
  • 品牌
版权与免责声明

①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。

②凡本网注明"来源:仪器网"的所有作品,版权均属于仪器网,转载时须经本网同意,并请注明仪器网(www.yiqi.com)。

③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。

④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi

热点文章
浮游生物泵助力南海微塑料分布输运机制研究
用户速递 | 花生壳造出长寿电池,赋能未来可持续储能
基尔中国 电磁流量计批量控制功能说明
JDS丨基于机器学习ML系统预测多巴胺受体D2作为银屑病的潜在药物靶点
鼠鼠体检报告大公开!信息量拉满
HS血管调控新视野:基于微电极同步测量技术揭示KV7通道与线粒体途径
基尔中国 卫生型电磁流量计日常维护技巧
靶向递送 “密码” 破解!生物型透射电镜助力清华大学Nature Materials
基尔中国 涡街流量计检定方法:标准表法和钟罩法
突破“视界”极限!数联生物近红外二区显微成像,解锁生命深层密码
近期话题
相关产品

在线留言

上传文档或图片,大小不超过10M
换一张?
取消