造成血管生成素1（ANG-1）ELISA试剂盒失误的原因

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下面分析血管生成素1(ANG-1)ELISA试剂盒操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法。1加样可能原因：1）血清或血浆标本分离不好即进行加样；2）手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长（特别是室内温度较高时）；3）加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。解决办法：1）标本为血清：**将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。2）加样后及时放入孵箱。3）加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。4）如果采用AT或其他全自动加样，**选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。5）标本较多时，请分批操作。2孵育可能原因：1）孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底；2）孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。解决办法：1）贴封片或加盖；2）按说明步骤严格控制操作时间。3洗板可能原因：1）采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。2）采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。3）反应板过多造成洗板等待时间长。解决办法：1）保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后**在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干；2）合理安排，或多用几台洗板机。4显色可能原因：1）显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂；2）加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法：1）显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用；2）加样时保持显色剂不外流；3）A、B液应避免接触金属器械。5终止可能原因如加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。血管生成素1(ANG-1)ELISA试剂盒收集样品、处理及保存方法：1.血清：需使用不含热原和内毒素的试管，在操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心机离心30分钟取上清。3.细胞上清液：3000转离心机离心10分钟去除颗粒和聚合物。4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心机离心10分钟取上清。5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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