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大鼠可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA简称试剂盒操作步骤说明

上传人: 上海科兴商贸有限公司 |大小:27KB|浏览:451次|时间:2018-10-03
大鼠可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA简称试剂盒操作步骤说明
文档简介

大鼠可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA简称试剂盒操作步骤1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul,余孔分别加标准品或待测样品100ul,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。2.弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100ul(取1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。3.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350ul/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。4.每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液)100ul,37℃,60分钟。5.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350ul/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。6.依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。7.依序每孔加终止溶液50ul,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后15分钟以内进行检测。大鼠可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA简称试剂盒注意事项1.每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是Z后加底物溶液及2NH2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。2.为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。3.未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。4.建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
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