化学发光免疫测定技术

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化学发光免疫测定技术化学发光免疫测定技术，化学发光免疫测定（chemiluminesentimmunoaay，CLIA）是免疫测定技术继酶免技术（EIA）、放免技术（RIA）、荧光免疫技术（FIA）和时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）之后发展的一项新兴测定技术。化学发光酶免疫测定（chemiluminescentenzymeimmunoaay，CLEIA）从标记物性质来看应属酶免疫测定。CLEIA测定中的两次抗原抗体反应步骤均与酶免疫测定相同，仅Z后一步酶反应所用的底物为发光剂而非显色剂。CLEIA中常用的两种标记酶是HRP和ALP，其原理如下。化学发光免疫测定技术，HRP标记的CLEIAHRP标记的CLEIA常用的底物为鲁米诺或其衍生物。鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行，通常以pH8．6的0．1mol／LTrig缓冲液作底物液，当HRP与鲁米诺在碱性环境下发生氧化反应时，鲁米诺将能量转移并Z终以发射光子的形式释放，而光的强度与被测物的浓度成正比；此外，HRP催化鲁米诺氧化的反应可被某些酚试剂（如邻碘酚）或萤火虫荧光素酶等加强。加强剂的作用是增强发光和延长发光时间，由此可提高检测的敏感度。化学发光免疫测定技术，ALP标记的CLEIA在以ALP为标记酶的CLEIA中，应用的底物一般为adamantyldioxetasephohate及其衍生物如D等。当ALP与底物相互作用时，ALP使底物由能量基态转变为激发态，当非稳态的底物以光子形式将能量转移，并回到基态时，其发光的强度则与被测物的浓度成正比，因此测定反应产物的发光强度即可获得被测物的浓度。化学发光免疫测定技术基本原理是将化学发光系统与免疫反应相结合，以检测样本中的抗原或抗体，由于它既具有免疫反应的高度特异性，又具有发光反应的高敏感性，且对环境公害小，因此近年来已被国内外临床实验室及科研单位，广泛应用于各种激素、特种蛋白及药物的监测和分析。化学发光分析技术根据其标记物的不同可大致分为3大类：化学发光酶免疫测定、化学发光标记免疫测定、电化学发光免疫测定。
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