抗体/蛋白HRP标记制备试剂盒产品说明书

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上海哈灵生物科技有限公司HL40029v.A抗体/蛋白HRP标记制备试剂盒产品说明书主要用途抗体/蛋白HRP标记制备试剂是一种旨在通过高碘酸氧化产生活化的辣根过氧化酶，与抗体或蛋白中氨基偶联反应，进一步还原和中和作用，确保复合体的稳定的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种种系的抗体、纯化蛋白的HRP标记。其应用于后续WESTERNBLOT、免疫组化、ELISA等。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，反应敏感，重复性好。技术背景辣根过氧化酶，分子量44Kd，常作为标记，用于免疫反应的定量检测（enzymeimmunoassay；EIA），例如免疫印迹WESTERNBLOT、免疫检测ELISA和免疫化学染色immunohistochemicalstaining等。辣根过氧化酶具有价廉、高纯、高特异活性、稳定等优点，成为主要的（占80％）抗体或蛋白缀和标记酶。基于辣根过氧化酶为糖蛋白，含有8个糖链，通过高碘酸避光氧化，使羟基和醛基分离后，活化的HRP既不失活，又能在碱性条件下，与所有蛋白或抗体存在的氨基进行偶联反应，形成席夫碱（Schiff'sbases），进而在酸性透析处理后去除剩余的高碘酸和预防自偶联。经过温和的硼氢化氰钠（sodiumcyanoborohydride）还原水合作用，以及乙醇胺（ethanolamine）或2-巯基乙胺（2-mercaptoethylamine）中和残余的醛基，使标记蛋白/抗体更加稳定。产品内容缓冲液（ReagentA）1毫升标记液（ReagentB）50微升还原液（ReagentC）200微升中和液（ReagentD）50微升保存液（ReagentE）1毫升产品说明书1份保存方式保存在－20℃冰箱里；有效保证6月用户自备目标抗体或蛋白：用于HRP标记1.5毫升离心管：用于样品反应操作和保存的容器震荡器：用于混匀反应物实验步骤移取10微升（总量100微克）用户自备的目标抗体或蛋白（分子量在160Kd左右或以下）加入90微升缓冲液（ReagentA），混匀加入10微升标记液（ReagentB），混匀室温下（25℃）孵育1小时或4℃冰箱里孵育16小时加入10微升还原液（ReagentC），混匀室温下孵育15分钟加入10微升中和液（ReagentD），混匀室温下孵育15分钟加入130微升保存液（ReagentE），混匀获得标记蛋白或抗体终浓度0.6毫克/毫升即刻放进-70℃保存或置于冰槽里备用或继续后续ELISA、WESTERNBLOT、IMMUNOHISTOLOGY等注意事项本产品为5次（100微克/次）操作操作时，须戴手套样品中避免含有叠氮化钠（sodiumazide）、Tris、甘氨酸（glycine）、氢氧化铵（NH4OH）等，否则干扰标记如果标记液（ReagentB）没有充分溶解，可以放在4℃冰箱里72小时或更长时间后使用如果需要增加标记量，则相应增加试剂用量如果标记500Kd以上的蛋白或抗体，则使用20微升标记液（ReagentB）即可标记效率取决于目标蛋白或抗体与活化HRP的分子摩尔浓度比例和结构关系HRP标记蛋白复合体在4℃温度下保持4周稳定；在－20℃温度下，保持6个月稳定标记抗体后续应用建议用量如下：应用标记抗体浓度ELISA250纳克/毫升至2.5微克/毫升WESTERNBLOT0.5微克/毫升至50微克/毫升IMMUNOHISTOLOGY2.0微克/毫升至5.0微克/毫升本公司提供系列蛋白/抗体标记试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定不含污染性蛋白酶
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