泰特气相色谱测定牛奶中的三种糖醇类甜味剂

目前牛奶中糖醇类甜味剂检测方法较单一，主要采用配备蒸发光散射检测器、二极管阵列检测器、示差折光检测器的gao效液相色谱仪，分析速度慢，而气相色谱法gao效、快速。为此，本文由泰特仪器色谱技术人员介绍了牛奶中糖醇含量的气相色谱测定方法，并对牛奶中蛋白质去除试剂进行优化，同时为保护色谱柱填充料和方便乙酰化处理，对比了两种干燥方法，为今后牛奶中糖醇类甜味剂的分析检测提供方法选择依据。

1、三种糖醇标准溶液的配制　

准确称取阿拉伯醇、木糖醇、甘露糖醇标准品各4mg（精确至0.01mg）于3个10mL容量瓶中，分别加入2mL吡啶，2mL乙酸酐，90℃下水浴30min，间歇振荡，使之乙酰化，取出冷却后，加丙酮定容，得到各标准品浓度为0.4mg/mL的储备液；准确吸取0.25mL三种糖醇标准储备液置10mL容量瓶中，用丙酮定容得到三种糖醇浓度分别为10μg/mL的混合标准溶液，并依照此方法配制30、50、70、90μg/mL的混合标准溶液，立即进行气相色谱分析，以峰面积（X）对相应糖醇的浓度（Y）进行线性回归分析。

2、三种糖醇乙酰化条件的确定　

当吡啶-乙酸酐（1∶1，V/V）时，以反应温度为70、80、90、100℃，反应时间为20、30、40、50min，进行三种糖醇乙酰化条件的组合实验。

3、样品标准溶液的配制　

分别称取阿拉伯醇、木糖醇、甘露糖醇标准品9mg（精确至0.01mg）于100mL容量瓶中，用纯水溶解定容成三种糖醇浓度分别为90μg/mL的样品标准溶液，供加标法进行蛋白质去除试剂和干燥方法对比实验。

4、样品的制备　

移取10mL纯牛奶于150mL烧杯中，加入3mL 1.2.3.1制备的样品标准溶液，得到分别加有270μg三种标准品的样品。分别加入5mL 0.3%硫酸锌溶液和0.3%氢氧化钡溶液，反应0.5h，将样液全部转移至离心管中，以10000r/min离心10min，得上清液。

5、样品的干燥　

旋转蒸发瓶中的样液利用旋转蒸发仪在50℃下旋蒸至近干；将上清液全部转移至培养皿中，在-20℃预冻3h，利用冷冻干燥机在-50℃下冷冻干燥12h。

6、样品的衍生　

向干燥后的样品中加入2mL吡啶，2mL乙酸酐，用保鲜膜密封培养皿，然后摇匀，90℃下水浴30min，间歇摇晃，使之乙酰化。反应完毕后冷却至室温，经0.45μm有机相滤膜过滤后，立即进行气相色谱分析，以保留时间定性，外标法定量。

7、色谱条件　

色谱柱：石英毛细管柱（30m× 320μm×0.25μm）；进样口温度：270℃；柱温：初始温度170℃，保留2min，以10℃/min升至220℃，保留2min，再以10℃/min升至270℃，保留10min；检测器温度：280℃；载气：高纯氮，恒流模式：1.2mL/min；尾吹气：45mL/min；分流比：40∶1；进样量：1μL。

8、检出限及精密度实验　

吸取10mL牛奶，加入3mL 90μg/mL样品标准溶液，按1.2.3进行样品前处理，平行进样6次，计算相对标准偏差以评价方法的精密度；以样品中能检出糖醇的zui低添加量为检出限。

9、回收率及重现性实验　

精密吸取3mL 90μg/mL样品标准溶液加入到10mL牛奶中，进行样品前处理，平行实验6次，对方法的回收率和重现性进行考察。

确立了衍生化时间及温度、色谱分离条件，以乙酸锌和氢氧化钡除去牛奶中蛋白质，经冷冻干燥，利用毛细管气相色谱定量分析糖醇类强化型牛奶中阿拉伯醇、木糖醇、甘露糖醇的方法。研究结果表明该方法具有良好的精密度和重复性，操作简单，适于分析糖醇类强化型牛奶中糖醇类甜味剂的含量，为以后牛奶中糖醇的检测分析提供方法和理论依据。

本文利用冷冻干燥处理与毛细管气相色谱外标法测定牛奶中的糖醇类甜味剂。牛奶用乙酸锌和氢氧化钡除去蛋白质后，经冷冻干燥，样品中的糖醇与吡啶-乙酸酐（1∶1，v/v）于90℃反应30min，生成的糖醇乙酰酯衍生物经HP-5毛细管柱色谱分离，氢火焰离子化检测器检测。结果表明：与旋转蒸发相比，冷冻干燥处理样品的回收率更高。在优化的色谱条件下，本方法在10～90μg/mL范围内线性关系良好（r=0.9974～0.9999），重复性好（RSD=1.37%～2.04%），平均加标回收率在91.17%～92.06%之间。该方法简单、快速、灵敏，适用于牛奶中糖醇类甜味剂含量的测定。