单细胞分选器如何调试？

       单细胞分选器如何调试？当单个悬浮颗粒通过喷嘴后在空气中被激光束照射并对激光进行散射，同时所带的荧光化合物发被激发并发射出荧光，检测器同时对散射光和荧光进行分析并对包裹细胞的液流进行充电，通过震荡液流使目标细胞包含在带电的液滴中，在通过高压静电偏转板时收集到指定容器中，实现对细胞的分析和分选。 

       单细胞分选器如何调试： 

       1、激光

单细胞分选器采用了固态激光，激光开启后应预热5分钟使激光稳定工作，当使用355nm的高功率激光时，应当预热30分钟，否则可能因高功率的紫外激光对仪器光学部件造成损坏。 

2、液流调整 

打开液流系统，点击触屏面板上的“Debubble”进行排气泡，当能观察到稳定的液流即可停止。调整喷嘴的上下、左右、前后千分尺和平衡台上的2个旋钮，使液流垂直对齐。 

3、光路校正

将单细胞分选器的质控（QC）荧光微球用无菌的超纯水按1：20进行稀释，上样微球，调整样品压力差使EPS为100，打开QC面板，调整激光的上下、左右、前后的千分尺和电压，使面板上各通道的信号形成最亮、最集中的一群，且CV值在2.5以下即可（如图1）。

4、 液滴调整

打开液流震荡开关，选择喷嘴直径，寻找激光位置，调整振荡频率（Frequency）、整幅（Amplitude）。选择到分选调整面板，打开静电偏转板电源并加电压到3000Volts，调整Charge Phase到分选液流偏转最差的角度，然后调整到以该数值加减180°的角度，得到稳定的四路预分选液流。MoFlo XDP使用了IntellisortⅡ智能化分选模块，使用70μm和100μm喷嘴时可通过计算机计算液滴延迟时间（Drop Delay）并自动微调振幅以维持液滴断点 。

5、分选设置

上样并通过在软件Summit V5.4.0上对细胞散射和荧光进行分析、设门，设定分选设置，选择分选位置，可最多同时对L1、L2、R1、R2四个位置分选四种特定的细胞，并适配0.5mL、1.5mL、2mL、5mL、15mL、50mL离心管及标准流式管作为上样和分选容器。同时单细胞分选器还可通过“CyClone”分选设置，使用玻片和不同规格的孔板进行单种细胞分选。

6、关机

分选完成后，调整压力差至5.0PSI，分别先后上样2mL5%次氯酸钠、75%乙醇、无菌超纯水进行管路清洗，关闭系统和激光，排除鞘液桶气压。