Gilson PIPETMAX® 和新冠状病毒肺炎COVID-19自动化RT-QPCR工作流

冠状病毒和新冠状病毒肺炎COVID-19

图 1

2019-nCoV 病毒颗粒渲染图

冠状病毒是属于冠状病毒科-网巢病毒目的一种包膜型正义RNA病毒，广泛存在于人类和其他哺乳动物体内。这些病毒是带有正单链RNA基因组和螺旋对称的核衣壳的包膜病毒。冠状病毒的基因组大小大约在26到32千碱基之间，是RNA病毒中ZD的一种。

COVID-19 检测的RT-QPCR 工作流

逆转录QPCR(RT-QPCR)结合RT-PCR和QPCR，通常用于检测呼吸道分泌物中的致病病毒。

临床呼吸道样本或其他可接受的样本，并按以下步骤进行测试。(图2)

图 2 

COVID-19的RT-QPCR工作流

PIPETMAX 和 RT-QPCR 的自动化

Gilson PIPETMAX^®全自动液样平台消除了液样转移的人为错误风险。单次液样操作量程范围为1μL -1200μL，可以同时运行1至8个通道。可移动式托盘能够适配96和384孔板。(图 3) 双在线移液头可以随时自动切换步骤所需的不同量程，在运行中移液头无需硬件更换。如果选配更多的移动托盘，可以满足在运行方法的同时进行下一轮配置，节约时间。（图 4）

图 3 

PIPETMAX^® 和TRILUTION^®micro软件

图 4

PIPETMAX 移动托盘

Pipetmax 的特点

PIPETMAX^® 是一套理想的高通量生物分析自动化液样处理方案。桌面式的尺寸可以轻松地适配任何实验室。通过外置式UV/HEPA系统，能够满足不同实验规范的需求。PIPETMAX^®可以提升操作人员的精确度、重现性，以及不同病毒样品之间的一致性。

✔PIPETMAX^® 可以消除用户间的误差

✔保护操作人员远离病原体

✔采用Gilson PIPETMAN^® 技术，确保JZ度

✔DIAMOND 带滤芯吸嘴(图 5)可以防止气溶胶污染

✔一套真正意义上适合任意试剂、试剂盒及方法的开放系统

RT-QPCR 工作流

核酸提取

RT-QPCR的实验扩增结果取决于样品模板RNA的质量和总量。在进行样品测试前，应该对RNA提取的回收率和纯度进行验证。 

根据商品化的提取试剂盒制造商的建议方法提取样品，可以得到高度纯化的RNA。

质量控制

由于RT-PCR的敏感性，所有检测应该采用严格的质量控制和质量保证流程。所有移液吸嘴均仅使用带滤芯型号。（图5）检测控制应与所有测试样品同时进行。

图5

Gilson 易拉装吸嘴（带滤芯）

RT-QPCR实验

RT-QPCR仪的参数(AB 7500 Fast DX)。

混合总管和孔板配置

TaqPath™ 一步法RT-qPCR 混合总管

添加样品模板

小心地加入5.0 μL 样品至样品孔。

添加对照模板

加入5 μL的nCoVPC(CDC 阳性对照) RNA 模板至样品孔。

数据分析及结果

运行完成后，按照仪器厂家的说明对数据进行保存和分析，并在CDC的指导下对数据进行进一步的分析和解读。

其他自动化应用

QPCR方法，尤其是使用TaqMan探针或类似的荧光杂交探针方法，被广泛的应用于各类病原体检测。（图6）

图 6

常规病原体检测实验

从发表报道中看，利用磁珠技术对肠道病毒、乙型肝炎、丙型肝炎、Epstein-Barr病毒、疱疹病毒、人乳头瘤病毒、乙型流感和SARS病毒的核酸检测方法已经实现自动化。 

总结

Gilson 的不同液样处理产品，例如 PIPETMAX 自动液样平台，可以和COVID-19疾病中RT-QPCR工作流结合，满足自动化需求。不断增长的检测量以及检测方法对提GX率以降低成本并保证实验结果有了越来越高的要求，因此分子诊断实验室也向着自动化、集成式、用户操作降低的方向不断发展。 

Gilson 自动化液样处理产品可应用于样品处理的各个流程，包括分析前的样品处理、核酸提取、PCR实验，具有宽泛的自动化和灵活度，提升了测试效率和标准化。(图 7)

图 7

分子诊断和筛选应用中不同级别的自动化方案

*本文中的RT-QPCR流程参考于美国CDC在2020年2月4日发布的指引，由于情况的不断变化可能与实际环境的操作流程有所不同。本文展示了PIPETMAX可以被用于协助完成RT-QPCR方法。