常用的免疫组织化学染色方法（下）

常用的免疫组化染色方法很多，有直接法和间接法。直接法是将酶或荧光素等标记在di一抗体上，然后用该被标记的di一抗体与组织细胞中的抗原结合，即可以显色或在荧光显微镜下观察结果；

间接法是将标记物标记在第二抗体或第三抗体（复合物）上，其方法是先将特异性的di一抗体与组织细胞中相应的抗原结合，再将被标记上标记物的第二抗体与di一抗体结合，后用显色剂显色或在荧光显微镜下观察结果。如果标记物是标记在第三抗体（复合物）上，则第二抗体与di一抗体结合后，再用被标记上标记物的第三抗体（复合物）与第二抗体结合，最后用显色剂显色或在荧光显微镜下观察结果。

常用的EPOS一步法属于直接法，EnVision二步法、PAP/APPAP法、LSAB（S-P）法、SABC法、和CSA法等属于间接法。相对来说直接法特异性高，敏感性低，而间接法则敏感性高，特异性低。

05 SABC 法  

抗生物素蛋白链菌素-生物素复合物（streptavidin biotincomplex，SABC）法方法和ABC法相类似，不同之处是SABC法用抗生物素蛋白链菌素代替了ABC法ABC复合物中的卵白素获得SABC复合物。由于抗生物素蛋白链菌素与生物素的亲和力更高，而且SABC复合物不需在使用前配制，所以SABC法比ABC法更加敏感和简单。

06 LDP 法  

酶标聚合物法（labelled dextran polymer，LDP）法应用了酶标聚合物技术，如EnVision检测系统，首先将辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记在葡聚糖聚合物上，然后再与第二抗体连接而形成EnVision二抗。

LDP法属于二步法，特异性一抗和组织细胞抗原结合后，再用EnVision二抗与抗原抗体复合物中的一抗结合，最后通过EnVision二抗上的酶参与显色反应。

由于EnVision二抗中的聚合物结构的独特，可以连接更多的二抗，使每个多聚物有超过20个位点与第一抗体结合，聚合物上能标记上的酶数量较多。因此在显色时有充足的酶与显色剂起反应。

因此LDP法的敏感性高于ABC、LSAB等方法。此外，LDP法中的第二抗体没有生物素的存在，不会出现ABC、LSAB等方法中含有的生物素与组织中内源性生物素起交叉反应的现象，因此LDP法的非特异性背景染色极低。

07  EPOS 法  

增强聚合物一步法（enhanced polymer one setp，EPOS）法也属于酶标聚合物法，和LDP法一样，是利用酶标聚合物技术，将辣根过氧化物酶标记在葡聚糖聚合物上，然后再与第一抗体连接而形成EPOS一抗。

EPOS法属于直接法，直接用EPOS一抗特异性和组织细胞抗原结合后，一抗上的酶参与显色反应。由于EPOS一抗中的聚合物上能标记上的酶数量较多，在显色时有充足的酶与显色剂起反应。因此EPOS法虽然是直接法，但具有高敏感性。

此外，EPOS一抗没有生物素的存在，不会出现ABC、LSAB等方法中含有的生物素与组织中内源性生物素起交叉反应的现象，背景清晰。但EPOS一抗种类较少，难以普及。

08  CSA 法  

催化信号放大（catlyzed signal amplification，CSA）法是应用一种放大试剂生物素化酪胺，与抗生物素蛋白链菌素-生物素-过氧化物酶复合物（streptavidin biotin-HRP）连接，在过氧化物酶作用下形成大量的生物素沉积物，再加入抗生物素蛋白链菌素-过氧化物酶复合物后，过氧化物酶与生物素沉积物形成大量的过氧化物酶聚合，聚合的过氧化物酶与显色剂起反应。在第三步应用了SABC法的SABC-HRP复合物，第五步应用了LSAB法的SA-HRP复合物。

由于CSA法加入了催化信号放大试剂，使信号不断放大，因此敏感性比EPOS一步法、EnVision二步法、PAP/APPAP法、LSAB（S-P）法和SABC等方法高。特别适用于检测较弱的组织抗原。

以上就是后四种常用的免疫组织化学染色方法的简介。如在实验中遇到困难，也可以选择Leica全自动免疫组化染色仪来协助您。