移液技巧第三课 | 节后工作如何事半功倍？

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移液课堂·第三课

让你找回做实验的自信

总的来说，常见的污染源有真菌、酵母、细菌和支原体。而真核生物由于构成了和其他真核生物细胞系的交叉污染，因此常常不易被发现。

那么今天的移液课堂就是为各位解决这一部分难题而来：实验中如何在无菌条件下移液？

实验室污染知多少

据相关统计，全世界实验室中使用的细胞系中 15-30% 有交叉污染或者识别错误，无论是其中哪种污染，都会给我们的实验带来很大 麻烦：

01-时间损耗

需要重复实验，进而导致时间成本增加

02-成本增加

由于消耗品使用量的增加而导致材料和试剂方面的成本升高

03-可靠性和重现性降低

由于细胞错误或者受到污染，将导致实验结果可靠性以及重现性的降低

CHO 细胞（上图）和 HL60 细胞（下图）被细菌污染

如何避免出现污染？

为了避免以上情况的出现，保持环境中污染物数量的减少是重中之重。

因此我们的实验环境要做到预防性卫生，包括：

▲ 定期清洁实验室、水浴和安全柜等

▲ 准备一件专用实验服只在细胞培养室穿

除了这些基本的无菌操作，针对移液，还有如下小窍门（以细胞培养为例）：

01-如何防止移液对样品的污染？

① 移液器中有样品 A 残留

② 样品 B 受到样品 A 污染

▲ 在细胞培养室使用专用的移液器

▲ 不要在打开的容器上方挥手

▲ 合理布局工作空间，有序操作

▲ 移液管放入生物安全柜前先消毒

▲ 每个移液器上要做好标记

▲ 使用无菌的滤芯吸头

▲ 对移液器清洁或者高压消毒

▲ 或使用外置活塞式分液器

▲ 选择正确的吸头长度，确保吸头不会触碰到容器内部

▲ 缓慢放液，防止液体流出或者喷洒，电动移液器可以确保缓慢匀速

▲ 使用完后将移液器挂回移液架上

02-如何防止气溶胶污染？

气体活塞式移液器易受到气溶胶污染

▲ 用滚动方式而非摇动来混合样品

▲ 将容器放置在相邻的位置，以避免距离过大

▲ 慢慢打开容器

▲ 使用滤芯吸头

▲ 将移液器直接插入液体中，避免液体溅起或气泡

▲ 或使用外置活塞式分液器

03-如何防止样品之间的交叉污染？

▲ 每次样品移取完后更换吸头

▲ 吸液放液缓慢进行，以免样品溅起

▲ 使用独立的培养皿或试剂瓶

杜绝污染如何选择合适的移液器？

用于无菌实验的移液器塑料材质应当是能够抗紫外线的，可帮助移液器安全留在疫苗箱或者生物安全箱中，而不会对移液器或者其功能产生有害影响。

除此之外，不同的移液器有着不同的优势，按需选择最适合的便能事半功倍：

01-电动助吸器

对于精度不是最重要的实验来说，比如洗涤步骤或者更换培养基的步骤，电动助吸器和 Eppendorf 移液管是不错的选择。

因为吸液量主要由操作者从血清移液管读取刻度来确定，因此精度不能完全保证。但是血清移液管的优点在于其长度，离细胞越远越安全。

02-手动移液器

手动移液器对水溶液来说是比较精准的，除此之外，它的精准度还受到操作者的移液技术和吸放液速度的影响。

03-电动移液器

电动移液器由电动马达控制，可做到速度恒定、定点准确、精准度和可重现性更高。

但是需要注意移取非水性溶液时，准确性和精密度可能会受到影响。

04-外置活塞式分液器

分液器精度高，且适用于所有类型的液体。

当我们在生物安全柜内操作时，可能无法完全保证移液要求的浸入深度及垂直的移液角度，这时候，使用分液器分配试剂或者种细胞，其浸入深度和移液角度都不会影响其准确性。

以上这些实用的移液技巧，大家都学会了吗？

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