养殖海参中敌敌畏的测定方法

今年的3.15晚会曝光了诸多问题，诸如“汉堡王”使用过期食材、养殖海参敌敌畏成箱放，关于海参养殖中大量使用敌敌畏这一现象，显然是违法的。敌敌畏属于农药，按照我国的农药管理条例，不能盲目扩大农药的使用范围。

敌敌畏是什么？

敌敌畏（Dichlorvos）是一种著名的有机磷类的农药。这类农药的特点是便宜且gao效，我国有机磷类农药的产量居世界第二。

毒性如何？

敌敌畏相比于其他的有机磷类农药，急性毒性算是比较大的了，也是很多其他有机磷类农药的代谢产物，属于国家明令禁止添加的非食用物质，长期暴露会有致癌性和神经毒性，所以能少接触尽量少接触。

为了保障人民的身体健康，加强对食品安全的监管，我国于2016年提出敌敌畏的检测方法：GB 23200.94-2016 食品安全国家标准 动物源性食品中di百虫、敌敌畏、蝇毒磷残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法。

仪器与试剂

1、仪器

GX液相色谱-质谱/质谱仪，超声波清洗仪，分析天平、旋涡混匀器、旋转蒸发仪、离心机、均质器。       

2、试剂

乙腈，甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、环己烷、硫酸钠、乙酸铵、符合GB/T6682的一级水、敌敌畏标准品：CAS 62-73-7，纯度≥97.6%。

溶液配制：50mmol/L乙酸铵溶液：称取0.385g乙酸铵溶于1000mL 水中。

敌敌畏标准储备液：准确称取适量敌敌畏标准品，用甲醇配制成浓度为100μg/mL浓度的混合标准储备液。此溶液在0°C～4°C冰箱中避光保存，可使用3个月。

空白样品提取液：用不含敌敌畏残留的样品，按照3.2制备空白样品提取液。

敌敌畏标准工作溶液：根据需要用空白样品提取液将标准储备液稀释成50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL的混合标准工作溶液。置于0°C～4°C冰箱中避光保存，可使用3天。

实验方法

1、干海参的复水

1.1预浸泡

取2只-3只干海参，称重约10g（精确至0.01g），置于1000mL烧杯中，倒入水（水量约为海参质量的50倍，并应浸没参体），再盖上表面皿，室温浸泡24h。

1.2清洗

在浸泡液中剖开海参体，清洗海参附着的泥砂，去除嘴部石灰质后，切成宽约5mm条状；将海参体，泥砂及嘴部石灰质均保留在原浸泡液中。

1.3水煮

将经1.2处理的试样及浸泡液于原烧杯中，盖上表面皿，大火煮沸，然后调至小火，保持沸腾继续煮30min，晾至室温后，置于0℃~10℃冰箱中，放置20h。煮沸及浸泡过程中应保持水量浸没参体。

1.4试样

将1.3处理的浸出液及海参体全部倒入1000mL量筒中，定容至600mL，混匀。取出海参放入烧杯中，加入600mL水，按1.3的方法再水煮一次，将在冰箱放置后的海参取出，用滤纸吸去表面水分，绞碎用于药物残留的测定。

2、提取与净化

2.1 准确称取5g均匀试样（精确到0.01g）于50mL具塞试管中，加入5g无水硫酸钠混匀，再加入15mL二氯甲烷，用均质器(10000r/min)均质2min，4000r/min离心3min，将有机相转移至100 mL梨形蒸馏瓶中，残渣再用2×10mL二氯甲烷均质提取二次。

2.2 离心合并有机相，于40℃旋转蒸发至2mL，将样液转移至5mL刻度试管中，并用少量二氯甲烷洗涤梨形蒸馏瓶，合并洗涤液到刻度试管中，室温通氮浓缩至干。定量加入1.0mL乙腈溶解残渣，加入2mL环己烷旋涡混匀2min后，2500r/min离心3min，将下层乙腈相过0.45μm微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

3、色谱参考条件

3.1 色谱柱：柱填料为十八烷基硅烷键合相的色谱柱，4.6×150mm，5μm或相当者；

3.2 流动相：甲醇：50mmol/L乙酸铵；

3.3 梯度洗脱程序：

3.4 流速：0.50mL/min或根据仪器条件优化；

3.5 柱温：40℃；

3.6 进样量：10μL；

3.7 离子源：电喷雾离子源；

3.8 扫描方式：正离子；

3.9 检测方式：多反应监测（MRM）；

3.10 质谱参考条件

监测离子对及电压参数：

a) 窗帘气（CUR）：15.00Pa；

b) 雾化气（GS1）：40.00Pa；

c) 辅助加热气（GS2）：45.00L/min；

d) 碰撞气（CAD）：7.00Pa；

e) 离子源喷雾器电压（IS）：5000.00V；

f) 喷雾针温度：（TEM）：550.00℃；

g) 定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞能量、碰撞室出口电压见下表。

4、测试

分别取10μL敌敌畏标准工作液和试样溶液，在GX液相色谱-质谱/质谱仪上测定敌敌畏的峰面积，用外标法计算敌敌畏残留量。

悟空K2025GX液相色谱仪