参考国标SN/T4675.12-2016测定葡萄酒中溶菌酶

溶菌酶（lysozyme）又称为胞壁质酶，是一种能水解细菌细胞壁黏多糖结构的碱性酶。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。因此，该酶具有KJ、XY、抗病毒等作用。溶菌酶作为一种安全性很高的天然防腐剂，在食品工业中被广泛应用。

国家标准SN/T 4675.12-2016中规定了葡萄酒中溶菌酶含量的GX液相色谱测定方法：经反相苯基柱分离后，用GX液相色谱荧光检测器或紫外检测器测定。

本应用参照上述标准，采用反相苯基柱TSKgel Phenyl-5PW RP分析溶菌酶，分离效果优异，满足标准中的分离要求。

溶液的配制

取溶菌酶 (0.1%酒石酸溶解) 适量，加流动相B溶解并稀释制成每1 mL中各约含5μg或50μg，作为样品。

分析条件

色谱柱：TSKgel Phenyl-5PW RP (4.6 mmI.D.×7.5cm)

流动相：A: 0.2% TFA 50% ACN, B: 0.2% TFA 1% ACN

梯度：梯度洗脱条件见下表

流速：0.8 mL/min

柱温：30℃

紫外波长：280 nm

荧光波长：激发波长 (λex) 276 nm，发射波长 (λem) 345 nm

进样量：50 μL

样品：溶菌酶 5 μg/mL以及50 μg/mL

分析结果

图1 溶菌酶5 μg/mL荧光检测器分离图谱

图2 溶菌酶50 μg/mL紫外检测器分离图谱