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使用UHPLC-SEC色谱柱优化尿激酶分析方法

发布:东曹(上海)生物科技有限公司
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尿激酶是从新鲜人尿中提取的,或从人肾组织培养中获得的一种酶蛋白,是临床上一种常用的溶解血栓的药物。它由高分子量尿激酶 (Mw=54000) 和低分子量尿激酶 (Mw=33000) 组成的混合物。

为使尿激酶达到ZJ分离效果,本应用使用粒径2 µm的TSKgel UP-SW2000超GX液相尺寸排阻色谱柱与G2000SWXL色谱柱,对尿激酶进行了对比分析。

溶液的配制

色谱流动相配制:0.2 mol/L磷酸二氢钠水溶液,用磷酸调pH至3.0 。

样品:尿激酶测试方法优化溶液浓度:2.5 mg/mL


分析条件

仪器:Thermo Ultimate3000

色谱柱1:TSKgel UP-SW2000 (2µm, 4.6 mmI.D.×30cm)

色谱柱2:TSKgel G2000SWXL (5µm, 7.8 mmI.D.×30cm)

流速:0.18 mL/min for UP-SW2000、0.5 mL/min for G2000SWXL

柱温:25℃

样品盘温度:10℃

进样量:10 µL

检测器:紫外检测器@280nm


分析结果

001.png

图1.  UP-SW2000色谱柱分离谱图

001.png

图2.  G2000SWXL色谱柱分离谱图

001.png

结果与讨论:

相较于G2000SWXL色谱柱,TSKgel UP-SW2000对多聚体、高分子量尿激酶、低分子量尿激酶的分离度均有所提高。

同时对比了等量溶质不同进样体积,高浓度样品小进样量,分离度较好一些。UP-SW2000色谱柱可满足药典要求:高分子量尿激酶峰面积占90%以上,且与低分子量尿激酶分离度大于1.0。


2020-11-30
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